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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于病毒和测序的问题
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daisyxiaowan

铁虫 (初入文坛)

[求助] 关于病毒和测序的问题已有2人参与

师姐检测一个病毒，用elisa和抗原片出来的结果居然是相反的，于是让我用pcr验证一下病毒  ，我用从抗原片上刮下来的东西提RNA反转录然后pcr，但是可能量太小了，检测不到，然后引物设计的也不是很好，阳性的有杂带。  这种情况要怎么继续呢？对了，之前别人有做过荧光pcr，说有扩增，但因为荧光pcr扩增片段很短，所以就让我做一下普通pcr，设计扩增片段长一些。

prc没结果的话也无法送去测序啊
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1楼2014-09-11 10:17:36
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

病毒的基因很少，能不能建mRNA库，用酵母扩增。
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5楼2014-09-15 12:22:29
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soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党

【答案】应助回帖

首先，你去pubmed看看关于这个病毒RNA检测的文献，一般都会有好几篇或者更多。
然后看看那篇文献的引用率比较高，再根据文献的引物，拿来主义的干活，去合成。
最后就是测试验证是不是有这个病毒。
如果扩增产物150bp以上，都能顺利进行测序的。
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4楼2014-09-15 12:13:02
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