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daisyxiaowan

铁虫 (初入文坛)

[求助] 关于病毒和测序的问题已有2人参与

师姐检测一个病毒,用elisa和抗原片出来的结果居然是相反的,于是让我用pcr验证一下病毒  ,我用从抗原片上刮下来的东西提RNA反转录然后pcr,但是可能量太小了,检测不到,然后引物设计的也不是很好,阳性的有杂带。  这种情况要怎么继续呢?对了,之前别人有做过荧光pcr,说有扩增,但因为荧光pcr扩增片段很短,所以就让我做一下普通pcr,设计扩增片段长一些。

prc没结果的话也无法送去测序啊
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daisyxiaowan

铁虫 (初入文坛)

2楼2014-09-12 09:17:09
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daisyxiaowan

铁虫 (初入文坛)

3楼2014-09-15 09:37:58
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soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党

【答案】应助回帖

首先,你去pubmed看看关于这个病毒RNA检测的文献,一般都会有好几篇或者更多。
然后看看那篇文献的引用率比较高,再根据文献的引物,拿来主义的干活,去合成。
最后就是测试验证是不是有这个病毒。
如果扩增产物150bp以上,都能顺利进行测序的。
4楼2014-09-15 12:13:02
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

病毒的基因很少,能不能建mRNA库,用酵母扩增。
5楼2014-09-15 12:22:29
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