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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » TAKARA的Not 1 ，Nco 1对T载体双酶切问题求教
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大爷给跪了

新虫 (小有名气)

[求助] TAKARA的Not 1 ，Nco 1对T载体双酶切问题求教 已有1人参与

构建了PMD19T载体的克隆载体，做双酶切的时候，用的酶是TAKARA的Not 1 和 Nco 1，体系是：Not 1 ,Nco 1=1ul，10xK buffer =2ul，0.1%BSA=2ul，质粒=1ul,灭菌水=up to 20ul。 但是切出来的目的片段不是我想要的，请问有没有哪位高手 用过这两种酶做过双酶切，求指导。
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1楼 2014-09-08 22:43:52
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huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
大爷给跪了(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-09-09 09:53:49
你的质粒太少了,体系没有问题,双酶切切出来不是想要的片断,可能是你本身克隆载体就有问题,插入的不是你的目的片断,也有可能是楼主把目的片断两端的酶切位点搞错了!
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2楼2014-09-09 09:51:31
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