应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 蛋白浓度过高加热成团
121/2返回列表12下一页
查看: 1224  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 蛋白浓度过高加热成团 已有1人参与

用RIPA裂解液提取的蛋白浓度过高，跑胶上样前加热变性就结成一团果冻状的东西了，该怎么解决？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-06 10:23:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader
引用回帖:
3楼: Originally posted by weizhi111 at 2014-09-06 19:56:16
你说的有道理，但我同一批样，浓度高的是19ug/ul左右，浓度稍低的是7-8ug/ul左右，就只有这个19ug/ul的出现这种现象，其他的正常。如果要sonicate，是在哪步做呢？是提取完蛋白之后超声，然后再加热变性还是？...

这浓度的确够高的！为什么要者么高的浓度？对我来说，3-4mg/ml已经足够高了，通常是1-2mg/ml。当然了，我常常用24孔板收集细胞做Western，所以不可能有很高的蛋白浓度。我一般是常规做一下sonication的。

什么时候做都可以。相信sonicate后会解决你的问题。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-09-07 09:02:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 应助指数+1, 鼓励回帖交流 2014-09-07 20:53:28
引用回帖:
5楼: Originally posted by weizhi111 at 2014-09-06 21:23:51
谢谢，不知超声多久，用多大功率合适，不会把蛋白打断吧...

1、时间不用太久，十几秒就可以了，如果再长，可以分几次超声，如每次10s，三次等。
2、功率取决于机器，用不着太大功率。
3、超声对蛋白无影响，除非大功率下长时间超声引起发热，造成蛋白变性。

超声时注意：如果你的体积太小，要特别注意用小功率，否则会产生大量气泡，使超声无效。最小体积要看你的探头的大小。就我而言，50微升以上都没问题。当然就操作而言，体积越大约容易。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2014-09-07 10:38:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
weizhi111(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-06 22:55:22
weizhi111: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-09-07 08:56:28
你侧过蛋白浓度吗？
这不是蛋白浓度过高的结果，是genomic DNA。只要sonicate以下就可以了。
赞一下 回复此楼
2楼2014-09-06 12:26:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-09-06 12:26:57
你侧过蛋白浓度吗？
这不是蛋白浓度过高的结果，是genomic DNA。只要sonicate以下就可以了。

你说的有道理，但我同一批样，浓度高的是19ug/ul左右，浓度稍低的是7-8ug/ul左右，就只有这个19ug/ul的出现这种现象，其他的正常。如果要sonicate，是在哪步做呢？是提取完蛋白之后超声，然后再加热变性还是？
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-07 08:56:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-09-07 09:02:39
这浓度的确够高的！为什么要者么高的浓度？对我来说，3-4mg/ml已经足够高了，通常是1-2mg/ml。当然了，我常常用24孔板收集细胞做Western，所以不可能有很高的蛋白浓度。我一般是常规做一下sonication的。

什么时 ...

谢谢，不知超声多久，用多大功率合适，不会把蛋白打断吧
赞一下 回复此楼
5楼2014-09-07 10:23:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-09-07 10:38:02
1、时间不用太久，十几秒就可以了，如果再长，可以分几次超声，如每次10s，三次等。
2、功率取决于机器，用不着太大功率。
3、超声对蛋白无影响，除非大功率下长时间超声引起发热，造成蛋白变性。

超声时注意 ...

谢谢，我试试，希望有效
赞一下 回复此楼
7楼2014-09-07 10:51:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱你的小虫

新虫 (初入文坛)
超声不会出现冻状物？我超声以后还有冻状物，离心DNA会沉淀？是不是要离心久点？
赞一下 回复此楼
8楼2014-09-09 17:40:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 爱你的小虫 at 2014-09-09 17:40:22
超声不会出现冻状物？我超声以后还有冻状物，离心DNA会沉淀？是不是要离心久点？

我超声了还是有冻状物，离心时间也挺长的（快20min-30min)了，有的还是不行，浓度低的相对要好一些。所以浓度还是别太高了。
赞一下 回复此楼
9楼2014-09-10 19:28:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱你的小虫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by weizhi111 at 2014-09-10 19:28:25
我超声了还是有冻状物，离心时间也挺长的（快20min-30min)了，有的还是不行，浓度低的相对要好一些。所以浓度还是别太高了。...

浓度低些没影响跑胶?多大浓度?

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
10楼2014-09-11 01:00:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 weizhi111 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研调剂 +6 呼呼？~+123456 2026-03-24 6/300 2026-03-25 22:55 by 418490947
[考研] 总分293求调剂 +4 加一一九 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:34 by barlinike
[考研] 一志愿中南大学化学学硕0703总分337求调剂 +7 niko- 2026-03-22 7/350 2026-03-25 20:14 by qingfeng258
[考研] 网络空间安全0839招调剂 +4 w320357296 2026-03-25 6/300 2026-03-25 17:59 by 255671
[考研] 求b区院校调剂 +4 周56 2026-03-24 5/250 2026-03-25 17:12 by yishunmin
[考研] 299求调剂 +7 shxchem 2026-03-20 9/450 2026-03-25 10:41 by lbsjt
[考研] 0703化学求调剂 +6 奶油草莓. 2026-03-22 7/350 2026-03-25 10:00 by shangxh
[考研] 化学调剂 +6 yzysaa 2026-03-21 6/300 2026-03-25 09:27 by aa331100
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +3 钢铁大炮 2026-03-24 3/150 2026-03-24 22:03 by bingxueer79
[考研] 求调剂 +5 林之夕 2026-03-24 5/250 2026-03-24 17:16 by dick_runner
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:46 by 星空星月
[考研] 求调剂 +7 十三加油 2026-03-21 7/350 2026-03-23 23:48 by 热情沙漠
[考研] 一志愿武理材料工程348求调剂 +6 ￣^￣゜汗 2026-03-19 9/450 2026-03-23 19:53 by pswait
[考研] 一志愿陕师大生物学071000，298分，求调剂 +3 SYA！ 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:09 by macy2011
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
[考研] 初试 317 +7 半拉月丙 2026-03-20 7/350 2026-03-21 22:26 by peike
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 279求调剂 +5 红衣隐官 2026-03-21 5/250 2026-03-21 14:59 by lature00
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭