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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 碳水化合物 » 考马斯亮蓝法测蛋白含量，空白的吸光值很高，什么原因啊？
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suyuting526

金虫 (初入文坛)

[求助] 考马斯亮蓝法测蛋白含量，空白的吸光值很高，什么原因啊？

我用考马斯亮蓝测蛋白含量，蒸馏水1ml+考马斯亮蓝5ml作为空白，吸光度达到0.7多，这也太高了，导致后面的样品灵敏度受到影响，空白怎么还能这么高啊？是我哪里出了问题吗？请高手赐教~必有重赏！
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日知----每日积累一点知识，时间久了就是“智”慧！
1楼 2013-07-10 16:57:27
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zybpxy

铁杆木虫 (著名写手)

致斋大人
弱弱的问一下楼上各位，考马斯亮蓝做蛋白质氨基酸这个重复性不是特别好吧~~~
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走的太远，别忘了为何出发
4楼2013-07-10 18:35:24
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普通回帖

hujiasong

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
suyuting526: 金币+1, ★有帮助, 谢谢回帖~ 2013-07-12 10:07:28
你自己看看是不是考马斯亮蓝加多了，或者是你的水本身有问题。建议用稍微好点的水
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2楼2013-07-10 17:01:18
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redyna渊

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
suyuting526: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢 2013-07-12 10:07:59
这个比例没问题，首先确定你的试剂配的没问题，再确定下水是不是有蛋白，小肽污染，再看看你用容器，试管枪头什么的。
0.7，你这后面会扣成负数的~一般空白的颜色很浅的，墨兰色
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3楼2013-07-10 17:10:16
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鱼丸粗面蔷蔷

新虫 (初入文坛)
★
感谢参与，应助指数 +1
suyuting526: 金币+1, 谢谢回帖~ 2013-07-12 10:10:04
hsd3521: 应助指数-1, 非有效应助 2013-07-12 11:37:55
请问楼主做过寡肽含量测定吗？求指教

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2013-07-10 22:46:21
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suyuting526

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zybpxy at 2013-07-10 18:35:24
弱弱的问一下楼上各位，考马斯亮蓝做蛋白质氨基酸这个重复性不是特别好吧~~~

是的~不太好，每次都做3组平行，做的过程中很仔细，只能这样减小误差了，你有更好的建议方法吗？
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6楼2013-07-12 10:09:33
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suyuting526

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 鱼丸粗面蔷蔷 at 2013-07-10 22:46:21
请问楼主做过寡肽含量测定吗？求指教

没做过~
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7楼2013-07-12 10:10:19
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ydq闲云野鹤

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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suyuting526: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢回帖~ 2013-07-12 12:13:24
这个没问题吧，我做的空白是1ml水加4ml考马斯亮蓝，反应10min,吸光值为0.857，然后调零，1ml样液加4ml考马斯亮蓝，反应10min后测吸光值，值大概为0.5，虽然不同样液不一样，但肯定不会为负值，含蛋白的样液与考马斯亮蓝反应后颜色明显比空白深好多呀。你是不是样品放的有问题呀？看看样液反应颜色是不是深一些
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8楼2013-07-12 10:37:44
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suyuting526

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by ydq闲云野鹤 at 2013-07-12 10:37:44
这个没问题吧，我做的空白是1ml水加4ml考马斯亮蓝，反应10min,吸光值为0.857，然后调零，1ml样液加4ml考马斯亮蓝，反应10min后测吸光值，值大概为0.5，虽然不同样液不一样，但肯定不会为负值，含蛋白的样液与考马斯 ...

后来稀释了一下样品，比之前稳定多了
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9楼2013-07-12 12:14:05
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幸福一号

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
suyuting526: 金币+2, ★有帮助, 谢谢回帖~ 2013-09-09 09:51:36
是不是配置的考马斯亮蓝的浓度太高，自己想的，不知对不对
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保持内心的清静
10楼2013-07-12 22:16:43
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