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suyuting526

金虫 (初入文坛)

[求助] 考马斯亮蓝法测蛋白含量,空白的吸光值很高,什么原因啊?

我用考马斯亮蓝测蛋白含量,蒸馏水1ml+考马斯亮蓝5ml作为空白,吸光度达到0.7多,这也太高了,导致后面的样品灵敏度受到影响,空白怎么还能这么高啊?是我哪里出了问题吗?请高手赐教~必有重赏!
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zybpxy

铁杆木虫 (著名写手)

致斋大人

弱弱的问一下楼上各位,考马斯亮蓝做蛋白质氨基酸这个重复性不是特别好吧~~~
走的太远,别忘了为何出发
4楼2013-07-10 18:35:24
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普通回帖

hujiasong

铜虫 (著名写手)


【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
suyuting526: 金币+1, 有帮助, 谢谢回帖~ 2013-07-12 10:07:28
你自己看看是不是考马斯亮蓝加多了,或者是你的水本身有问题。建议用稍微好点的水
2楼2013-07-10 17:01:18
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redyna渊

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
suyuting526: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢 2013-07-12 10:07:59
这个比例没问题,首先确定你的试剂配的没问题,再确定下水是不是有蛋白,小肽污染,再看看你用容器,试管枪头什么的。
0.7,你这后面会扣成负数的~一般空白的颜色很浅的,墨兰色
3楼2013-07-10 17:10:16
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鱼丸粗面蔷蔷

新虫 (初入文坛)


感谢参与,应助指数 +1
suyuting526: 金币+1, 谢谢回帖~ 2013-07-12 10:10:04
hsd3521: 应助指数-1, 非有效应助 2013-07-12 11:37:55
请问楼主做过寡肽含量测定吗?求指教

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2013-07-10 22:46:21
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suyuting526

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zybpxy at 2013-07-10 18:35:24
弱弱的问一下楼上各位,考马斯亮蓝做蛋白质氨基酸这个重复性不是特别好吧~~~

是的~不太好,每次都做3组平行,做的过程中很仔细,只能这样减小误差了,你有更好的建议方法吗?
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6楼2013-07-12 10:09:33
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suyuting526

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 鱼丸粗面蔷蔷 at 2013-07-10 22:46:21
请问楼主做过寡肽含量测定吗?求指教

没做过~
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7楼2013-07-12 10:10:19
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ydq闲云野鹤

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
suyuting526: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢回帖~ 2013-07-12 12:13:24
这个没问题吧,我做的空白是1ml水加4ml考马斯亮蓝,反应10min,吸光值为0.857,然后调零,1ml样液加4ml考马斯亮蓝,反应10min后测吸光值,值大概为0.5,虽然不同样液不一样,但肯定不会为负值,含蛋白的样液与考马斯亮蓝反应后颜色明显比空白深好多呀。你是不是样品放的有问题呀?看看样液反应颜色是不是深一些
8楼2013-07-12 10:37:44
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suyuting526

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by ydq闲云野鹤 at 2013-07-12 10:37:44
这个没问题吧,我做的空白是1ml水加4ml考马斯亮蓝,反应10min,吸光值为0.857,然后调零,1ml样液加4ml考马斯亮蓝,反应10min后测吸光值,值大概为0.5,虽然不同样液不一样,但肯定不会为负值,含蛋白的样液与考马斯 ...

后来稀释了一下样品,比之前稳定多了
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9楼2013-07-12 12:14:05
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幸福一号

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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suyuting526: 金币+2, 有帮助, 谢谢回帖~ 2013-09-09 09:51:36
是不是配置的考马斯亮蓝的浓度太高,自己想的,不知对不对
保持内心的清静
10楼2013-07-12 22:16:43
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