24小时热门版块排行榜    

查看: 1419  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 蛋白浓度过高加热成团 已有1人参与

用RIPA裂解液提取的蛋白浓度过高,跑胶上样前加热变性就结成一团果冻状的东西了,该怎么解决?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 爱你的小虫 at 2014-09-09 17:40:22
超声不会出现冻状物?我超声以后还有冻状物,离心DNA会沉淀?是不是要离心久点?

我超声了还是有冻状物,离心时间也挺长的(快20min-30min)了,有的还是不行,浓度低的相对要好一些。所以浓度还是别太高了。
9楼2014-09-10 19:28:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
weizhi111(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-06 22:55:22
weizhi111: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-09-07 08:56:28
你侧过蛋白浓度吗?
这不是蛋白浓度过高的结果,是genomic DNA。只要sonicate以下就可以了。
2楼2014-09-06 12:26:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-09-06 12:26:57
你侧过蛋白浓度吗?
这不是蛋白浓度过高的结果,是genomic DNA。只要sonicate以下就可以了。

你说的有道理,但我同一批样,浓度高的是19ug/ul左右,浓度稍低的是7-8ug/ul左右,就只有这个19ug/ul的出现这种现象,其他的正常。如果要sonicate,是在哪步做呢?是提取完蛋白之后超声,然后再加热变性还是?
3楼2014-09-07 08:56:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader


引用回帖:
3楼: Originally posted by weizhi111 at 2014-09-06 19:56:16
你说的有道理,但我同一批样,浓度高的是19ug/ul左右,浓度稍低的是7-8ug/ul左右,就只有这个19ug/ul的出现这种现象,其他的正常。如果要sonicate,是在哪步做呢?是提取完蛋白之后超声,然后再加热变性还是?...

这浓度的确够高的!为什么要者么高的浓度?对我来说,3-4mg/ml已经足够高了,通常是1-2mg/ml。当然了,我常常用24孔板收集细胞做Western,所以不可能有很高的蛋白浓度。我一般是常规做一下sonication的。

什么时候做都可以。相信sonicate后会解决你的问题。
4楼2014-09-07 09:02:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 师弟论文见刊大半年才想起来申请专利,还能抢救一下吗? +5 13108017953 2026-09-21 5/250 2026-09-27 16:46 by Leogzhya
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意! +3 zju2000 2026-09-26 3/150 2026-09-27 16:26 by lala1008
[博后之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:42 by 4IW0sJvtEqX8
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:26 by 4IW0sJvtEqX8
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:21 by 4IW0sJvtEqX8
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:15 by 4IW0sJvtEqX8
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 oeyPlfmMUpOC 2026-09-26 3/150 2026-09-27 09:13 by 4IW0sJvtEqX8
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:44 by XgCC8uTcwILl
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:42 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:32 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:08 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:05 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:53 by XgCC8uTcwILl
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:50 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 6/300 2026-09-27 05:42 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 5/250 2026-09-25 11:19 by yhq9807
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 7/350 2026-09-25 11:18 by yhq9807
信息提示
请填处理意见