| 查看: 1370 | 回复: 9 | ||||
dingxinag木虫 (小有名气)
|
[求助]
蛋白质浓度检测
|
|||
| 最近在做一个蛋白质和细胞相互作用的实验，但是没法检测作用如何，想来想去只能通过测定PBS中剩余蛋白质的量来确定蛋白质的消耗量。但是有一个问题，本人非生物的，不知道什么方法精确，在论坛里搜了一下，各种方法都有人用，也看不太懂，有没有哪位高手能帮一下啊，我用的蛋白质浓度是 50 ug/ml in PBS，用什么方法能精确测出剩余的蛋白质浓度呢? 谢谢谢谢 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有199人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 蛋白质印迹目的蛋白质量测定
已经有5人回复
- 急求革兰氏阳性菌做蛋白质总量测定时前处理肿么弄啊？？？？
已经有6人回复
- 【求助】藻类protein的测定
已经有12人回复
- 求助：关于考马斯亮蓝法测定蛋白质
已经有23人回复
- 蛋白浓度测定的经验公式 标题要长啊 才能引起注意
已经有16人回复
- 考马斯亮蓝菌体总蛋白浓度相关问题
已经有16人回复
- 蛋白质浓度测定
已经有14人回复
- 蛋白质纯度检测
已经有21人回复
- 【求助/交流】求教 如何测定蛋白质的摩尔浓度
已经有12人回复
- 【求助/交流】蛋白质含量测定问题
已经有24人回复
- 【求助/交流】关于Bradford法测蛋白含量的问题
已经有4人回复
- 【求助/交流】BSA法测蛋白质浓度的原理和方法
已经有19人回复
- BCA试剂盒的使用方法
已经有3人回复
- 【求助/交流】蛋白浓度测定 BSA法或适宜方法
已经有5人回复
- 【原创】蛋白质快速测定方法步骤
已经有5人回复
- 【求助】蛋白质含量的测定都有哪几种方法，适用情况以及优缺点。
已经有10人回复
bleach060452
新虫 (小有名气)
- MolEPI: 2
- 应助: 68 (初中生)
- 金币: 969.9
- 散金: 15
- 红花: 4
- 帖子: 201
- 在线: 88.2小时
- 虫号: 1004577
- 注册: 2010-04-24
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★
1949stone: 回帖置顶 2013-06-28 12:58:26
1949stone: 金币+1, good 2013-06-28 13:00:55
1949stone: 回帖置顶 2013-06-28 12:58:26
1949stone: 金币+1, good 2013-06-28 13:00:55
|
http://www.beyotime.com/bca.htm 应该是没问题的~~  QQ截图20130627153047.png |
5楼2013-06-27 15:52:45
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dingxinag: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-06-28 11:51:53
1949stone: 回帖置顶 2013-06-28 12:59:13
感谢参与，应助指数 +1
dingxinag: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-06-28 11:51:53
1949stone: 回帖置顶 2013-06-28 12:59:13
|
测定一下蛋白质的浓度不就行了。比如：Bradford法 http://zhidao.baidu.com/question/322367292.html 考马斯亮蓝法（Bradford法）测定蛋白质浓度1、试剂：（1）考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，用蒸馏水稀释至1000ml, 滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250, 4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。（2）标准蛋白质溶液：纯的牛血清血蛋白，根据其纯度同0.15mol/L NaCl配制成100 ug/ml蛋白溶液。2. 器材： （1）可见光分光光度计 （2）旋涡混合器 3、标准曲线的制作 试管编号 0 1 2 3 4 5 6100ug/ml标准蛋白（ml） 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.60.15mol/L NaCl （ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4考马斯亮蓝试剂 （ml） 5 5 5 5 5 5 5摇匀，1h内以0号管为空白对照,在595nm处比色 以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug），在坐标轴上绘制标准曲线。4、样品中蛋白质含量的测定 另取两支干净的试管（做一重复），加入合适浓度的待测样品，使其测定值在标准曲线的范围内，测定方法同上，由样品液的吸光度查标准曲线即可求出含量。注意事项：1、 如果要求严格，最好在试剂加入后的5~20min内测定光 吸收，因为这段时间内颜色是最稳定的。2、 若选择在旋涡混合器上混合，注意不要太剧烈，以免产生大量气泡而难于消除。 |
6楼2013-06-28 00:08:34
bleach060452
新虫 (小有名气)
- MolEPI: 2
- 应助: 68 (初中生)
- 金币: 969.9
- 散金: 15
- 红花: 4
- 帖子: 201
- 在线: 88.2小时
- 虫号: 1004577
- 注册: 2010-04-24
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
2楼2013-06-27 15:40:59
dingxinag
木虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1814.7
- 散金: 179
- 红花: 3
- 帖子: 286
- 在线: 248.4小时
- 虫号: 1096002
- 注册: 2010-09-11
- 专业: 有机合成
3楼2013-06-27 15:46:56
laoshi0633
木虫 (职业作家)
- 应助: 31 (小学生)
- 金币: 2880.6
- 红花: 2
- 帖子: 3541
- 在线: 633.9小时
- 虫号: 424291
- 注册: 2007-07-22
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
4楼2013-06-27 15:50:55
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
【答案】应助回帖
1949stone: 我以前一个公司用过“盐酸胍法” 很快 2013-06-28 12:59:49
7楼2013-06-28 00:09:33
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
【答案】应助回帖
★
1949stone: 金币+1, 还是很认真负责的态度 2013-06-28 13:00:09
1949stone: 金币+1, 还是很认真负责的态度 2013-06-28 13:00:09
|
http://blog.163.com/mzy_l/blog/static/2824467520071014150280/ 我引用的网上材料，我都是至少大致看过，认为至少没有明显错误和可操作才贴上来的！ |
8楼2013-06-28 00:12:59
dingxinag
木虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1814.7
- 散金: 179
- 红花: 3
- 帖子: 286
- 在线: 248.4小时
- 虫号: 1096002
- 注册: 2010-09-11
- 专业: 有机合成
9楼2013-06-28 11:52:47
1949stone
荣誉版主 (知名作家)
海纳百川
- MolEPI: 4
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 2.38
- 金币: 2627.9
- 散金: 3394
- 红花: 177
- 沙发: 8
- 帖子: 9830
- 在线: 2692.8小时
- 虫号: 765987
- 注册: 2009-05-08
- 性别: GG
- 专业: 药物分析
- 管辖: 分子生物
10楼2013-06-28 13:02:14
