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dingxinag

木虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质浓度检测

最近在做一个蛋白质和细胞相互作用的实验，但是没法检测作用如何，想来想去只能通过测定PBS中剩余蛋白质的量来确定蛋白质的消耗量。但是有一个问题，本人非生物的，不知道什么方法精确，在论坛里搜了一下，各种方法都有人用，也看不太懂，有没有哪位高手能帮一下啊，我用的蛋白质浓度是 50 ug/ml in PBS，用什么方法能精确测出剩余的蛋白质浓度呢?  谢谢谢谢
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1楼2013-06-27 15:22:50
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回帖置顶 ( 共有2个 )

bleach060452

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
1949stone: 回帖置顶 2013-06-28 12:58:26
1949stone: 金币+1, good 2013-06-28 13:00:55
引用回帖:
3楼: Originally posted by dingxinag at 2013-06-27 15:46:56
请问这个是通用的吗...

http://www.beyotime.com/bca.htm

应该是没问题的~~
蛋白质浓度检测
QQ截图20130627153047.png
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岂能尽如人意，但求无愧我心
5楼2013-06-27 15:52:45
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dingxinag: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-06-28 11:51:53
1949stone: 回帖置顶 2013-06-28 12:59:13
测定一下蛋白质的浓度不就行了。比如：Bradford法

http://zhidao.baidu.com/question/322367292.html

考马斯亮蓝法（Bradford法）测定蛋白质浓度1、试剂：（1）考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，用蒸馏水稀释至1000ml, 滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250, 4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。（2）标准蛋白质溶液：纯的牛血清血蛋白，根据其纯度同0.15mol/L NaCl配制成100 ug/ml蛋白溶液。2. 器材： （1）可见光分光光度计 （2）旋涡混合器 3、标准曲线的制作
试管编号        0        1        2        3        4        5        6100ug/ml标准蛋白（ml）        0.0        0.1        0.2        0.3        0.4        0.5        0.60.15mol/L NaCl （ml）        1        0.9        0.8        0.7        0.6        0.5        0.4考马斯亮蓝试剂 （ml）        5        5        5        5        5        5        5摇匀，1h内以0号管为空白对照,在595nm处比色                                                       
以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug），在坐标轴上绘制标准曲线。4、样品中蛋白质含量的测定                    另取两支干净的试管（做一重复），加入合适浓度的待测样品，使其测定值在标准曲线的范围内，测定方法同上，由样品液的吸光度查标准曲线即可求出含量。注意事项：1、  如果要求严格，最好在试剂加入后的5~20min内测定光   吸收，因为这段时间内颜色是最稳定的。2、  若选择在旋涡混合器上混合，注意不要太剧烈，以免产生大量气泡而难于消除。
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6楼2013-06-28 00:08:34
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普通回帖

bleach060452

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dingxinag: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-06-27 15:46:39
BCA 蛋白定量试剂盒
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岂能尽如人意，但求无愧我心
2楼2013-06-27 15:40:59
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dingxinag

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bleach060452 at 2013-06-27 15:40:59
BCA 蛋白定量试剂盒

请问这个是通用的吗
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3楼2013-06-27 15:46:56
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laoshi0633

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dingxinag: 金币+5, ★有帮助, 谢谢 2013-06-27 15:54:02
BCA 蛋白定量试剂盒
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学习是一种信仰
4楼2013-06-27 15:50:55
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

1949stone: 我以前一个公司用过“盐酸胍法” 很快 2013-06-28 12:59:49
http://www.biomart.cn/experiment/430/465/468/26033.htm
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7楼2013-06-28 00:09:33
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
1949stone: 金币+1, 还是很认真负责的态度 2013-06-28 13:00:09
http://blog.163.com/mzy_l/blog/static/2824467520071014150280/

我引用的网上材料，我都是至少大致看过，认为至少没有明显错误和可操作才贴上来的！
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8楼2013-06-28 00:12:59
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dingxinag

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-06-28 00:08:34
测定一下蛋白质的浓度不就行了。比如：Bradford法

http://zhidao.baidu.com/question/322367292.html

考马斯亮蓝法（Bradford法）测定蛋白质浓度1、试剂：（1）考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50 ...

嗯，看了看，打算采用这个方法，因为用的蛋白质浓度低
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9楼2013-06-28 11:52:47
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, stone斑斑也很认真负责的啊 2013-06-28 14:42:26
dingxinag: 金币+5, ★有帮助 2013-06-28 22:19:51
我以前一个公司用过“盐酸胍法” 很快  

还会有你可以再cnki里搜索一下 有很多这样的文章

再一你可以参考药典 里面有方法 都是可以用的
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海纳百川止于至善
10楼2013-06-28 13:02:14
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