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dingxinag木虫 (小有名气)
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蛋白质浓度检测
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| 最近在做一个蛋白质和细胞相互作用的实验，但是没法检测作用如何，想来想去只能通过测定PBS中剩余蛋白质的量来确定蛋白质的消耗量。但是有一个问题，本人非生物的，不知道什么方法精确，在论坛里搜了一下，各种方法都有人用，也看不太懂，有没有哪位高手能帮一下啊，我用的蛋白质浓度是 50 ug/ml in PBS，用什么方法能精确测出剩余的蛋白质浓度呢? 谢谢谢谢 |
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【答案】应助回帖
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dingxinag: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-06-28 11:51:53
1949stone: 回帖置顶 2013-06-28 12:59:13
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1949stone: 回帖置顶 2013-06-28 12:59:13
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测定一下蛋白质的浓度不就行了。比如：Bradford法 http://zhidao.baidu.com/question/322367292.html 考马斯亮蓝法（Bradford法）测定蛋白质浓度1、试剂：（1）考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，用蒸馏水稀释至1000ml, 滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250, 4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。（2）标准蛋白质溶液：纯的牛血清血蛋白，根据其纯度同0.15mol/L NaCl配制成100 ug/ml蛋白溶液。2. 器材： （1）可见光分光光度计 （2）旋涡混合器 3、标准曲线的制作 试管编号 0 1 2 3 4 5 6100ug/ml标准蛋白（ml） 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.60.15mol/L NaCl （ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4考马斯亮蓝试剂 （ml） 5 5 5 5 5 5 5摇匀，1h内以0号管为空白对照,在595nm处比色 以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug），在坐标轴上绘制标准曲线。4、样品中蛋白质含量的测定 另取两支干净的试管（做一重复），加入合适浓度的待测样品，使其测定值在标准曲线的范围内，测定方法同上，由样品液的吸光度查标准曲线即可求出含量。注意事项：1、 如果要求严格，最好在试剂加入后的5~20min内测定光 吸收，因为这段时间内颜色是最稳定的。2、 若选择在旋涡混合器上混合，注意不要太剧烈，以免产生大量气泡而难于消除。 |
6楼2013-06-28 00:08:34
bleach060452
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