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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 急求革兰氏阳性菌做蛋白质总量测定时前处理肿么弄啊？？？？
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haihaome

铁虫 (初入文坛)

[求助] 急求革兰氏阳性菌做蛋白质总量测定时前处理肿么弄啊？？？？

革兰氏阳性菌做蛋白质总量测定时前处理肿么弄啊？？？？有些人说用溶菌酶溶了之后用超生破碎，但是溶菌酶的加入会不会对总体蛋白总量测定有影响啊，还有人说用裂解液处理，裂解液对革兰氏阳性菌也有效吗？菇凉的菌是芽孢杆菌，细胞壁较厚该肿么办？ 求高手指点啊。。。。。。。。急求。。。。
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1楼2013-01-06 17:03:55
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hqsinberg

木虫 (著名写手)

清风小木虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
haihaome: 金币+10 2013-01-06 20:11:44
我以前是超声波破碎测定蛋白质浓度。你可以用溶菌酶，加入前测定其质量不就可以了（每毫克酶含有多少蛋白质）
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2楼2013-01-06 19:50:09
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haihaome

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hqsinberg at 2013-01-06 19:50:09
我以前是超声波破碎测定蛋白质浓度。你可以用溶菌酶，加入前测定其质量不就可以了（每毫克酶含有多少蛋白质）

请问溶菌酶用的浓度需要多大，另外超声需要的具体条件是多少
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3楼2013-01-06 20:11:31
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hqsinberg

木虫 (著名写手)

清风小木虫
引用回帖:
3楼: Originally posted by haihaome at 2013-01-06 20:11:31
请问溶菌酶用的浓度需要多大，另外超声需要的具体条件是多少...

这个真不知道了。你搜索一下你这株菌株的相关报道或类似菌株的报道，然后自己大概优化一下功率和时间，破碎方式就可以了
相同细胞以西跑破碎后，蛋白最多为保准
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4楼2013-01-06 21:06:46
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xiangsophie

铜虫 (小有名气)
我提过芽孢杆菌的蛋白，是用溶菌酶加超声破碎（我用的是1000w,30min, 超声1min,停1min,真个过程在冰上进行）因为我的实验不需要测浓度，但是提完后感觉还挺好的，要是怕浓度低的话可以用浓缩试剂盒浓缩下蛋白
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5楼2013-01-07 10:58:04
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lidanye

金虫 (小有名气)
我们也有做类似的菌，用的是超声破碎(振幅40%，5s on 5s off, 超声总时间5min)或者french press
不过目的是测酶活
一般能拿到差不多10 mg/mL总蛋白
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6楼2013-01-07 13:01:37
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学
没做过，做的多得是提取DNA，先用破壁酶，再用溶菌酶。

不知道《分子克隆》这本书上有没有操作规程，小木虫有这套资料
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环境卫生、微生物学、卫生应急
7楼2013-01-08 05:38:36
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