应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 最近蛋白诱导表达遇到了瓶颈
211/3返回列表123下一页
查看: 2813  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

紫夜微蓝

新虫 (初入文坛)

[求助] 最近蛋白诱导表达遇到了瓶颈 已有5人参与

本人新手，第一次做蛋白的诱导表达，不知为何始终表达不出。。用的载体是pET32a，BL21（BE3）宿主菌，IPTG 0.1-1mM梯度诱导，试过了37度4h、20度、25度过夜，但始终未见明显条带。。现在无从下手了

恳请论坛的各位高手们给予宝贵的意见，小女子感激不尽
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-04 15:04:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
30度12小时尝试过没有？
赞一下 回复此楼
2楼2014-09-04 16:24:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

紫夜微蓝

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-09-04 16:24:59
30度12小时尝试过没有？

没有，但28度8小时尝试过诶，是不是时间太短呢
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-04 16:28:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

留小保

铁虫 (小有名气)
之前测序什么的全没有问题吗？
赞一下 回复此楼
人生若只如初见 何事秋风悲画扇
4楼2014-09-04 17:37:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

紫夜微蓝

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 留小保 at 2014-09-04 17:37:09
之前测序什么的全没有问题吗？

只测了目的片段的正确性，没有问题。自己查了下稀有密码子数，不知道怎么才算多
赞一下 回复此楼
5楼2014-09-04 19:49:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wmx551551

新虫 (小有名气)
换载体啊亲
回复此楼
6楼2014-09-05 16:02:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xipha

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1, 如果要IPTG梯度诱导的话,要小心培养基里面的成分. 有时候培养基里面的糖就足够诱导了.
2, 你的融合蛋白有细胞毒性么? 如果有的话,摇不起来是很常见的,需要加大抗生素浓度,延长诱导前摇菌时间, 降低培养基里面的乳糖类似物的含量,减少诱导时间. 2小时以上的诱导就不用试了.
3, 包涵体蛋白, 如果你的表达蛋白容易形成包涵体,需要透析复性.
暂时就能想到这么多,不行的话就像楼上说的,楼主换表达体系吧. 祝顺利
赞一下 回复此楼
7楼2014-09-06 02:48:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

紫夜微蓝

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xipha at 2014-09-06 02:48:47
1, 如果要IPTG梯度诱导的话,要小心培养基里面的成分. 有时候培养基里面的糖就足够诱导了.
2, 你的融合蛋白有细胞毒性么? 如果有的话,摇不起来是很常见的,需要加大抗生素浓度,延长诱导前摇菌时间, 降低培养基里面的 ...

谢谢，我现在诱导前后有差异了，但是大小比我预测的要小很多（预测37kd，实际约17kd上下）。不明白是怎么回事啊
赞一下 回复此楼
8楼2014-09-07 09:44:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xipha

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 紫夜微蓝 at 2014-09-07 09:44:35
谢谢，我现在诱导前后有差异了，但是大小比我预测的要小很多（预测37kd，实际约17kd上下）。不明白是怎么回事啊...

这个就不懂了, 照理说单阅读框是不会有几个亚基的. 会不会不是你的蛋白?
赞一下 回复此楼
9楼2014-09-09 08:23:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

可能是蛋白有毒性，或者蛋白分子量大。小蛋白表达量高。
赞一下 回复此楼
10楼2014-09-09 12:29:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 紫夜微蓝 的主题更新
211/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +16 羊腰板 2026-08-21 17/850 2026-08-23 23:02 by tianxiaochun
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +12 大萍1987 2026-08-20 15/750 2026-08-23 20:44 by 大萍1987
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 炎黄贵胄 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭