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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 最近蛋白诱导表达遇到了瓶颈
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wolfman840

木虫 (正式写手)
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3楼: Originally posted by 紫夜微蓝 at 2014-09-04 16:28:05
没有，但28度8小时尝试过诶，是不是时间太短呢...

可能的，低温诱导要过夜的。
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11楼2014-09-09 15:32:07
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紫夜微蓝

新虫 (初入文坛)
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9楼: Originally posted by xipha at 2014-09-09 08:23:18
这个就不懂了, 照理说单阅读框是不会有几个亚基的. 会不会不是你的蛋白?...

也有可能是表达了部分？或者标签？？
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12楼2014-09-10 09:20:42
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xipha

木虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 紫夜微蓝 at 2014-09-10 09:20:42
也有可能是表达了部分？或者标签？？...

你的意思是说你克隆的时候移码了,然后出现终止子?
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13楼2014-09-12 04:06:16
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璧月

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

你说没有明显条带，有没有做过wb
有一种情况，菌体本身有蛋白与目的蛋白位置重叠。
我也是没有明显条带，组氨酸标签，能挂柱，目的蛋白的位置今天在这里，明天在那里，我都被整晕了，不知洗下来的哪个是目的哪个是杂蛋白。

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14楼2014-09-12 07:49:31
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紫夜微蓝

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by xipha at 2014-09-12 04:06:16
你的意思是说你克隆的时候移码了,然后出现终止子?...

我现在做了pET32a空载体的诱导对照，发现和重组载体诱导前后都是出现了和标签蛋白大小差不多的条带啊

本人没有经验，不知道目的蛋白没有出现，但出现标签蛋白算不算正常情况？？
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15楼2014-09-12 10:33:22
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紫夜微蓝

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 璧月 at 2014-09-12 07:49:31
你说没有明显条带，有没有做过wb
有一种情况，菌体本身有蛋白与目的蛋白位置重叠。
我也是没有明显条带，组氨酸标签，能挂柱，目的蛋白的位置今天在这里，明天在那里，我都被整晕了，不知洗下来的哪个是目的哪个是 ...

我现在不清楚一个问题，就是目的蛋白表达失败时，标签是否能表达成功？
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16楼2014-09-12 10:46:51
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璧月

捐助贵宾 (正式写手)
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16楼: Originally posted by 紫夜微蓝 at 2014-09-12 10:46:51
我现在不清楚一个问题，就是目的蛋白表达失败时，标签是否能表达成功？...

要看测序的结果了
你的问题有点不对，表达失败有很多种原因
移码突变发生，后面所有的氨基酸都会出错，包括下游标签。
你最好问一下前面做转化、设计引物、连接载体的人，仔细看看测序结果
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17楼2014-09-12 13:23:45
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璧月

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
16楼: Originally posted by 紫夜微蓝 at 2014-09-12 10:46:51
我现在不清楚一个问题，就是目的蛋白表达失败时，标签是否能表达成功？...

pET-32a应该也是his-tag，六个组氨酸标签，非常小，电泳跑不出来吧
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18楼2014-09-12 13:27:49
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紫夜微蓝

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 璧月 at 2014-09-12 13:27:49
pET-32a应该也是his-tag，六个组氨酸标签，非常小，电泳跑不出来吧...

不止his-tag。我去重新测序看一下
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19楼2014-09-12 14:29:29
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xuejia174

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
20楼2014-09-12 15:15:38
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