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紫夜微蓝

新虫 (初入文坛)

[求助] 最近蛋白诱导表达遇到了瓶颈 已有5人参与

本人新手,第一次做蛋白的诱导表达,不知为何始终表达不出。。用的载体是pET32a,BL21(BE3)宿主菌,IPTG 0.1-1mM梯度诱导,试过了37度4h、20度、25度过夜,但始终未见明显条带。。现在无从下手了

恳请论坛的各位高手们给予宝贵的意见,小女子感激不尽
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紫夜微蓝

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 璧月 at 2014-09-12 07:49:31
你说没有明显条带,有没有做过wb
有一种情况,菌体本身有蛋白与目的蛋白位置重叠。
我也是没有明显条带,组氨酸标签,能挂柱,目的蛋白的位置今天在这里,明天在那里,我都被整晕了,不知洗下来的哪个是目的哪个是 ...

我现在不清楚一个问题,就是目的蛋白表达失败时,标签是否能表达成功?
16楼2014-09-12 10:46:51
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
30度12小时尝试过没有?
2楼2014-09-04 16:24:59
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紫夜微蓝

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-09-04 16:24:59
30度12小时尝试过没有?

没有,但28度8小时尝试过诶,是不是时间太短呢
3楼2014-09-04 16:28:05
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留小保

铁虫 (小有名气)

之前测序什么的全没有问题吗?
人生若只如初见 何事秋风悲画扇
4楼2014-09-04 17:37:09
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