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紫夜微蓝

新虫 (初入文坛)

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[求助] 最近蛋白诱导表达遇到了瓶颈已有5人参与

本人新手，第一次做蛋白的诱导表达，不知为何始终表达不出。。用的载体是pET32a，BL21（BE3）宿主菌，IPTG 0.1-1mM梯度诱导，试过了37度4h、20度、25度过夜，但始终未见明显条带。。现在无从下手了

恳请论坛的各位高手们给予宝贵的意见，小女子感激不尽

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1楼 2014-09-04 15:04:39

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xipha

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

1, 如果要IPTG梯度诱导的话,要小心培养基里面的成分. 有时候培养基里面的糖就足够诱导了.
2, 你的融合蛋白有细胞毒性么? 如果有的话,摇不起来是很常见的,需要加大抗生素浓度,延长诱导前摇菌时间, 降低培养基里面的乳糖类似物的含量,减少诱导时间. 2小时以上的诱导就不用试了.
3, 包涵体蛋白, 如果你的表达蛋白容易形成包涵体,需要透析复性.
暂时就能想到这么多,不行的话就像楼上说的,楼主换表达体系吧. 祝顺利