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dinding

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白诱导表达前，培养至OD值0.6，怎么更换培养基，进行下面的诱导

如题，看到很多网友说菌液摇至OD0.6时，更换新鲜的培养基，再加IPTG进行诱导；我想知道的是如果摇的是50ml或更大的体积怎么换呢？离心？还是怎么的？非常急，在线等！
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1楼 2013-07-29 19:31:25
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
dinding(myprayer代发): 金币+1, good 2013-07-30 00:03:09
如果诱导与培养的培养基种类一样，一般就在原培养物里加IPTG。如果诱导培养基不同，可以离心重悬在新的培养基里。
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2楼2013-07-29 23:20:05
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草蔻年华

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-31 14:12:16
我们实验室做的都是在原培养基里继续培养诱导表达的，没有更换培养基。用的是大肠杆菌。
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4楼2013-07-31 14:09:51
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2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个很简单，5000rpm离心5min后，用缓冲液洗一下，再离心，再加入你需要的培养基就好了
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自主创业者，捣腾生物试剂
6楼2013-08-01 10:40:06
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普通回帖

dinding

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-29 23:20:05
如果诱导与培养的培养基种类一样，一般就在原培养物里加IPTG。如果诱导培养基不同，可以离心重悬在新的培养基里。

谢谢，看了很多诱导表达的文章，希望恩能够表达出我的蛋白!
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3楼2013-07-31 08:01:08
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dinding

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 草蔻年华 at 2013-07-31 14:09:51
我们实验室做的都是在原培养基里继续培养诱导表达的，没有更换培养基。用的是大肠杆菌。

好的，谢谢！
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5楼2013-08-01 07:44:17
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-01 12:06:31
楼上的回答都很精彩。我就总结下，如果一样的培养基，直接加iptg诱导表达就好了，如果培养基不一样，离心下，用PBS洗下，换上新培养基加IPTG诱导就好了。
我估计你应该是原培养基
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7楼2013-08-01 10:49:34
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dinding

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by ericyo918 at 2013-08-01 10:49:34
楼上的回答都很精彩。我就总结下，如果一样的培养基，直接加iptg诱导表达就好了，如果培养基不一样，离心下，用PBS洗下，换上新培养基加IPTG诱导就好了。
我估计你应该是原培养基

是的，因为我的蛋白达到110kDa，预实验几次表达都很低，看到有人说换培养基可以提高蛋白的表达量，就想试试
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8楼2013-08-02 09:59:29
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dinding

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 2008101111 at 2013-08-01 10:40:06
这个很简单，5000rpm离心5min后，用缓冲液洗一下，再离心，再加入你需要的培养基就好了

谢谢
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9楼2013-08-02 09:59:45
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by dinding at 2013-08-02 10:59:29
是的，因为我的蛋白达到110kDa，预实验几次表达都很低，看到有人说换培养基可以提高蛋白的表达量，就想试试...

表达量低的话，优化下表达的条件试试。
祝一切顺利
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10楼2013-08-02 10:09:02
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