24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 3386  |  回复: 10

dinding

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白诱导表达前,培养至OD值0.6,怎么更换培养基,进行下面的诱导

如题,看到很多网友说菌液摇至OD0.6时,更换新鲜的培养基,再加IPTG进行诱导;我想知道的是如果摇的是50ml或更大的体积怎么换呢?离心?还是怎么的?非常急,在线等!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
dinding(myprayer代发): 金币+1, good 2013-07-30 00:03:09
如果诱导与培养的培养基种类一样,一般就在原培养物里加IPTG。如果诱导培养基不同,可以离心重悬在新的培养基里。
2楼2013-07-29 23:20:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

草蔻年华

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-31 14:12:16
我们实验室做的都是在原培养基里继续培养诱导表达的,没有更换培养基。用的是大肠杆菌。
4楼2013-07-31 14:09:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个很简单,5000rpm离心5min后,用缓冲液洗一下,再离心,再加入你需要的培养基就好了
自主创业者,捣腾生物试剂
6楼2013-08-01 10:40:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

dinding

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-29 23:20:05
如果诱导与培养的培养基种类一样,一般就在原培养物里加IPTG。如果诱导培养基不同,可以离心重悬在新的培养基里。

谢谢,看了很多诱导表达的文章,希望恩能够表达出我的蛋白!
3楼2013-07-31 08:01:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dinding

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 草蔻年华 at 2013-07-31 14:09:51
我们实验室做的都是在原培养基里继续培养诱导表达的,没有更换培养基。用的是大肠杆菌。

好的,谢谢!
5楼2013-08-01 07:44:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-01 12:06:31
楼上的回答都很精彩。我就总结下,如果一样的培养基,直接加iptg诱导表达就好了,如果培养基不一样,离心下,用PBS洗下,换上新培养基加IPTG诱导就好了。
我估计你应该是原培养基
7楼2013-08-01 10:49:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dinding

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by ericyo918 at 2013-08-01 10:49:34
楼上的回答都很精彩。我就总结下,如果一样的培养基,直接加iptg诱导表达就好了,如果培养基不一样,离心下,用PBS洗下,换上新培养基加IPTG诱导就好了。
我估计你应该是原培养基

是的,因为我的蛋白达到110kDa,预实验几次表达都很低,看到有人说换培养基可以提高蛋白的表达量,就想试试
8楼2013-08-02 09:59:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dinding

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 2008101111 at 2013-08-01 10:40:06
这个很简单,5000rpm离心5min后,用缓冲液洗一下,再离心,再加入你需要的培养基就好了

谢谢
9楼2013-08-02 09:59:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by dinding at 2013-08-02 10:59:29
是的,因为我的蛋白达到110kDa,预实验几次表达都很低,看到有人说换培养基可以提高蛋白的表达量,就想试试...

表达量低的话,优化下表达的条件试试。
祝一切顺利
10楼2013-08-02 10:09:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dinding 的主题更新
信息提示
请填处理意见