24小时热门版块排行榜    

查看: 7942  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lfieng_1990

新虫 (初入文坛)


[求助] QPCR溶解曲线问题 已有2人参与

各位好:
       最近做对一个基因做验证QPCR实验,扩增曲线显示几乎没有扩增,溶解曲线如下,前面一部分比较高,溶解峰看起来也还好,不知道是什么原因?

QPCR溶解曲线问题


QPCR溶解曲线问题-1
Melt Curve.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangyunjing

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-08-28 22:56:27
前面比较高的荧光值是反应体系中的背景荧光值,主要是SYBR Green I和你的模板结合发出的荧光信号,由于目标产物浓度太低,所以背景值显得高些。扩增比较好情况下,目标产物的溶解曲线的荧光值远远高于背景荧光值,就不会有这种现象了。
rainwater
3楼2014-08-28 15:49:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

令狐少陈

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-28 18:02:40
是SYBR相对定量吗?
先说说扩增曲线,只能说明你的起始模版不够,或者引物扩增效率太低(可能退火稳定引起也可能本身引物不好),说明你没有做普通PCR摸条件验证,一般30个循环跑电泳看不到清晰的条带肯定不行。
其次看你的溶解曲线,后面Tm85 说明你的条带应该扩出来了,并且重在一起,应该是你的目的片段。但前面那么高的峰,可能是你的引物一开始就是二聚体,后面才慢慢分开扩增片段。你跑个胶看看有没有引物!
多多交流,海纳百川
2楼2014-08-28 13:50:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lfieng_1990

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
2楼: Originally posted by 令狐少陈 at 2014-08-28 13:50:36
是SYBR相对定量吗?
先说说扩增曲线,只能说明你的起始模版不够,或者引物扩增效率太低(可能退火稳定引起也可能本身引物不好),说明你没有做普通PCR摸条件验证,一般30个循环跑电泳看不到清晰的条带肯定不行。
...

多谢了,好专业的回答~
4楼2014-08-28 16:54:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lfieng_1990

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
3楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-08-28 15:49:17
前面比较高的荧光值是反应体系中的背景荧光值,主要是SYBR Green I和你的模板结合发出的荧光信号,由于目标产物浓度太低,所以背景值显得高些。扩增比较好情况下,目标产物的溶解曲线的荧光值远远高于背景荧光值,就 ...

哦,了解了,多谢
5楼2014-08-28 16:55:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +10 医学老男孩 2026-08-13 28/1400 2026-08-13 22:44 by 医学老男孩
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +14 documentary 2026-08-10 16/800 2026-08-13 16:39 by 润生71
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +9 家与远方 2026-08-10 14/700 2026-08-13 09:41 by 臭臭不臭01
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
信息提示
请填处理意见