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andyzhengwp金虫 (小有名气)
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[求助]
关于in-fusion PCR问题 已有4人参与
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我现在要将一个片段无缝的插入到一个质粒的特定位点中，Clontech的In-Fusion试剂盒已经买了，但是发现它需要将质粒线性化，如果酶切线性化的话将不是无缝连接，会有几个碱基多出来，质粒有太大无法pcr方法线性化。 求助：1，有没有好的方法师质粒不加碱基线性化（酶切之后再PCR，肯定会在以前质粒的基础上多出几个碱基来的）？ 2.或者有什么好的方法直接实现将一个片段无缝的插入到一个质粒的特定位点中？ |
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xiaoweiwei121
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【答案】应助回帖
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andyzhengwp: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-08-20 09:07:25
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-20 23:06:57
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经常用这个infusion kit 如果引物没问题，成功率没得说，一般没失过手，平板上阳性克隆90%以上。 不过我的载体4k多，设计了引物可以直接扩出来，没尝试过酶切的方法 楼主还是像楼上说的改善一下条件，扩一下吧 因为这个设计引物太重要了，曾经犯了个错误，某个引物的重复序列后边多了几个碱基，就死活做不出来了 问了他们公司的技术支持，才知道的原因 |
7楼2014-08-20 00:55:05
2楼2014-08-19 12:40:35
ksws0465326
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andyzhengwp
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