| 查看: 3391 | 回复: 27 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
andyzhengwp金虫 (小有名气)
|
[求助]
关于in-fusion PCR问题 已有4人参与
|
||
|
我现在要将一个片段无缝的插入到一个质粒的特定位点中，Clontech的In-Fusion试剂盒已经买了，但是发现它需要将质粒线性化，如果酶切线性化的话将不是无缝连接，会有几个碱基多出来，质粒有太大无法pcr方法线性化。 求助：1，有没有好的方法师质粒不加碱基线性化（酶切之后再PCR，肯定会在以前质粒的基础上多出几个碱基来的）？ 2.或者有什么好的方法直接实现将一个片段无缝的插入到一个质粒的特定位点中？ |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有80人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于PCR的问题
已经有4人回复
- 重叠延伸PCR（overlap extension PCR）的问题，头疼啊
已经有4人回复
- 有关重叠PCR的问题求指导，谢谢。。
已经有16人回复
- PCR大片段问题
已经有15人回复
- 如何设计In-Fusion引物
已经有9人回复
- 关于重叠PCR的问题~
已经有6人回复
- 求助师兄师姐~有关于巢式PCR的问题~~help
已经有11人回复
- 求解PCR问题《忘记加水的前后》
已经有13人回复
- 关于qPCR的几个问题，求解答
已经有3人回复
- 关于PCR整个质粒的问题
已经有7人回复
- fusion pcr 3000bp and m2400bp
已经有12人回复
- overlap PCR之问题
已经有16人回复
- 关于融合PCR的问题
已经有14人回复
- 请教real time pcr问题，谢谢！
已经有10人回复
- 重叠pcr\跳跃pcr的问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】请教个关于inverse PCR的问题
已经有21人回复
- 【求助/交流】关于降落pcr的问题！
已经有4人回复
- 【求助/交流】PCR延伸问题
已经有12人回复
xiaoweiwei121
荣誉版主 (文坛精英)
这潭水蓝的深邃
- MolEPI: 5
- 应助: 18 (小学生)
- 贵宾: 39.097
- 金币: 106416
- 散金: 2773
- 红花: 197
- 沙发: 109
- 帖子: 35580
- 在线: 2157.8小时
- 虫号: 426591
- 注册: 2007-07-28
- 性别: MM
- 专业: 蛋白质组学
- 管辖: 虫友互识
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
andyzhengwp: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-08-20 09:07:25
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-20 23:06:57
感谢参与，应助指数 +1
andyzhengwp: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-08-20 09:07:25
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-20 23:06:57
|
经常用这个infusion kit 如果引物没问题，成功率没得说，一般没失过手，平板上阳性克隆90%以上。 不过我的载体4k多，设计了引物可以直接扩出来，没尝试过酶切的方法 楼主还是像楼上说的改善一下条件，扩一下吧 因为这个设计引物太重要了，曾经犯了个错误，某个引物的重复序列后边多了几个碱基，就死活做不出来了 问了他们公司的技术支持，才知道的原因 |
7楼2014-08-20 00:55:05
2楼2014-08-19 12:40:35
ksws0465326
金虫 (小有名气)
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 885.4
- 红花: 6
- 帖子: 124
- 在线: 74.5小时
- 虫号: 3263751
- 注册: 2014-06-09
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
3楼2014-08-19 13:32:12
andyzhengwp
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 578.5
- 散金: 666
- 红花: 6
- 帖子: 282
- 在线: 83.5小时
- 虫号: 1683410
- 注册: 2012-03-11
- 性别: MM
- 专业: 昆虫学
4楼2014-08-19 14:52:12
