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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于in-fusion PCR问题
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andyzhengwp

金虫 (小有名气)

[求助] 关于in-fusion PCR问题 已有4人参与

我现在要将一个片段无缝的插入到一个质粒的特定位点中，Clontech的In-Fusion试剂盒已经买了，但是发现它需要将质粒线性化，如果酶切线性化的话将不是无缝连接，会有几个碱基多出来，质粒有太大无法pcr方法线性化。
求助：1，有没有好的方法师质粒不加碱基线性化（酶切之后再PCR，肯定会在以前质粒的基础上多出几个碱基来的）？
         2.或者有什么好的方法直接实现将一个片段无缝的插入到一个质粒的特定位点中？
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1楼 2014-08-19 10:53:45
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-19 12:46:28
andyzhengwp: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-08-19 14:56:28
酶切线性化，然后用Klenow酶大片段 补平，不过引物设计的时候得注意了
赞一下 回复此楼
2楼2014-08-19 12:40:35
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