应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于in-fusion PCR问题
41/1返回列表
查看: 3199  |  回复: 27
查看全部回帖 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

andyzhengwp

金虫 (小有名气)

[求助] 关于in-fusion PCR问题 已有4人参与

我现在要将一个片段无缝的插入到一个质粒的特定位点中，Clontech的In-Fusion试剂盒已经买了，但是发现它需要将质粒线性化，如果酶切线性化的话将不是无缝连接，会有几个碱基多出来，质粒有太大无法pcr方法线性化。
求助：1，有没有好的方法师质粒不加碱基线性化（酶切之后再PCR，肯定会在以前质粒的基础上多出几个碱基来的）？
         2.或者有什么好的方法直接实现将一个片段无缝的插入到一个质粒的特定位点中？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
每天坚持一点点，终会成功！相信自己
1楼 2014-08-19 10:53:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
andyzhengwp: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-08-20 09:07:25
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-20 23:06:57
经常用这个infusion kit
如果引物没问题，成功率没得说，一般没失过手，平板上阳性克隆90%以上。
不过我的载体4k多，设计了引物可以直接扩出来，没尝试过酶切的方法
楼主还是像楼上说的改善一下条件，扩一下吧
因为这个设计引物太重要了，曾经犯了个错误，某个引物的重复序列后边多了几个碱基，就死活做不出来了
问了他们公司的技术支持，才知道的原因
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2014-08-20 00:55:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by andyzhengwp at 2014-08-20 09:11:54
谢谢支持，你用的kit是什么公司的啊？PCR线性化不会出现碱基缺失或者其他的问题吧？你做的用一对还是用一个引物啊？...

和你一个公司的 clontech
没有出现过这个问题
一对引物
赞一下 回复此楼
15楼2014-08-20 23:16:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主
引用回帖:
13楼: Originally posted by andyzhengwp at 2014-08-20 21:14:01
这是跑的图，左到右一次是8k marker，对照质粒，线性化PCR产物。我怎么看都看不懂，是不是没有P出来啊？

M8O$G{0%V%8(8A3@QTRW}G1.jpg
...

感觉好像p的不好
赞一下 回复此楼
16楼2014-08-20 23:17:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 andyzhengwp 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭