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wzp9012

铁虫 (著名写手)

[求助] 请教各位师兄师姐,蛋白电泳出问题了 已有3人参与

小弟最近在纯化蛋白,并用SDS-PAGE电泳检测。先前跑的电泳还算正常,条带都是从分离胶交界处那开始分离,但最近几次跑的电泳都莫名其妙的到中间才开始分离,而且感觉不少蛋白都沉积在一起,跑最下面去了分不开。请教各位师兄师姐,有没有出现过类似的情况,这是什么地方出问题了还望告知小弟。

请教各位师兄师姐,蛋白电泳出问题了
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zero19871029

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wzp9012(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-18 15:45:32
跑胶时电压的情况是怎么样的,跑浓缩胶的时候电压可以适当调低一点,等到marker差不多能够分清楚时(我们用的是thermo的预染marker,能够看到红色条带时就算分开了)就可以加电压了,这样跑出来的条带比较好看。
另外就是你的分离胶的问题,是不是pH或者浓度跟之前不太一样,此外分离不同大小的蛋白时用的浓度也是不一样的
2楼2014-08-18 11:34:44
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clj881128

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wzp9012(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-18 15:45:47
这要看你蛋白的大小和所用胶的浓度了,建议胶浓度增大一些。
3楼2014-08-18 15:36:21
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wzp9012

铁虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by clj881128 at 2014-08-18 15:36:21
这要看你蛋白的大小和所用胶的浓度了,建议胶浓度增大一些。

我用的是10%分离胶,5%的浓缩胶,目的蛋白理论上在43Kda左右
4楼2014-08-21 15:44:25
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wzp9012

铁虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zero19871029 at 2014-08-18 11:34:44
跑胶时电压的情况是怎么样的,跑浓缩胶的时候电压可以适当调低一点,等到marker差不多能够分清楚时(我们用的是thermo的预染marker,能够看到红色条带时就算分开了)就可以加电压了,这样跑出来的条带比较好看。
另 ...

电压先前用150v跑过正常的,这回用的130v
5楼2014-08-21 15:51:05
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clj881128

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by wzp9012 at 2014-08-21 15:44:25
我用的是10%分离胶,5%的浓缩胶,目的蛋白理论上在43Kda左右...

一直都是用这一个浓度吗?有没有做过对比试验?样品和以前的一样?胶配得有没有问题?
6楼2014-08-28 13:20:39
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令狐少陈

铜虫 (小有名气)

你是不是做胶的时候加反了,先加分离胶,再加浓缩胶。如果marker都这样肯定是你的问题。或者电压我们一般80V30min 120V1h 你呢
多多交流,海纳百川
7楼2014-08-28 13:44:00
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帖航

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


wzp9012(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-28 21:57:57
应该是胶浓度低,电压影响不大,我们都是200V恒压的,以前伯乐的技术说他们用300V电压跑,我也看过他们的胶,效果也挺好的。
8楼2014-08-28 14:08:08
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