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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 请教各位师兄师姐，蛋白电泳出问题了
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wzp9012

铁虫 (著名写手)

[求助] 请教各位师兄师姐，蛋白电泳出问题了 已有3人参与

小弟最近在纯化蛋白，并用SDS-PAGE电泳检测。先前跑的电泳还算正常，条带都是从分离胶交界处那开始分离，但最近几次跑的电泳都莫名其妙的到中间才开始分离，而且感觉不少蛋白都沉积在一起，跑最下面去了分不开。请教各位师兄师姐，有没有出现过类似的情况，这是什么地方出问题了还望告知小弟。

请教各位师兄师姐，蛋白电泳出问题了
20140527205706.jpg
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1楼 2014-08-18 08:25:11
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zero19871029

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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wzp9012(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-18 15:45:32
跑胶时电压的情况是怎么样的，跑浓缩胶的时候电压可以适当调低一点，等到marker差不多能够分清楚时（我们用的是thermo的预染marker，能够看到红色条带时就算分开了）就可以加电压了，这样跑出来的条带比较好看。
另外就是你的分离胶的问题，是不是pH或者浓度跟之前不太一样，此外分离不同大小的蛋白时用的浓度也是不一样的
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2楼2014-08-18 11:34:44
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clj881128

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wzp9012(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-18 15:45:47
这要看你蛋白的大小和所用胶的浓度了，建议胶浓度增大一些。
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3楼2014-08-18 15:36:21
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wzp9012

铁虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by clj881128 at 2014-08-18 15:36:21
这要看你蛋白的大小和所用胶的浓度了，建议胶浓度增大一些。

我用的是10%分离胶，5%的浓缩胶，目的蛋白理论上在43Kda左右
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4楼2014-08-21 15:44:25
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wzp9012

铁虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zero19871029 at 2014-08-18 11:34:44
跑胶时电压的情况是怎么样的，跑浓缩胶的时候电压可以适当调低一点，等到marker差不多能够分清楚时（我们用的是thermo的预染marker，能够看到红色条带时就算分开了）就可以加电压了，这样跑出来的条带比较好看。
另 ...

电压先前用150v跑过正常的，这回用的130v
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5楼2014-08-21 15:51:05
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clj881128

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by wzp9012 at 2014-08-21 15:44:25
我用的是10%分离胶，5%的浓缩胶，目的蛋白理论上在43Kda左右...

一直都是用这一个浓度吗？有没有做过对比试验？样品和以前的一样？胶配得有没有问题？
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6楼2014-08-28 13:20:39
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令狐少陈

铜虫 (小有名气)
你是不是做胶的时候加反了，先加分离胶，再加浓缩胶。如果marker都这样肯定是你的问题。或者电压我们一般80V30min 120V1h 你呢
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多多交流，海纳百川
7楼2014-08-28 13:44:00
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帖航

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
wzp9012(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-28 21:57:57
应该是胶浓度低，电压影响不大，我们都是200V恒压的，以前伯乐的技术说他们用300V电压跑，我也看过他们的胶，效果也挺好的。
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8楼2014-08-28 14:08:08
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