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各位毛细管电泳的师兄师姐好,哪位能帮帮忙
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各位虫虫师兄师姐好,偶是用毛细管电泳测蛋白的,但是突然之间,检测出现了异常现象,基线不稳定,像锯齿状一样,这是为什么呢? 另外,为什么做蛋白非得用DTT或者β-巯基乙醇啊?能不能不用啊?他们到底是什么作用?很难闻耶,能不能不用啊? |
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【答案】应助回帖
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感谢参与,应助指数 +1
crity328: 金币+2, 感谢应助,欢迎常来~ 2012-09-28 09:01:34
感谢参与,应助指数 +1
crity328: 金币+2, 感谢应助,欢迎常来~ 2012-09-28 09:01:34
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DTT或者β-巯基乙醇是用来防止氧化的,蛋白中有容易被氧化的二硫键等。 异常现象,基线不稳定,像锯齿状一样,这样的问题你需要一点点排除问题。 我建议首先考察是否是蛋白吸附影响,即是否是柱子的问题,在用氢氧化钠冲洗柱后,用最稳定的硼砂缓冲液走DMSO,考察基线是否稳定。 如不是,可以考察是否是缓冲液问题,缓冲液配制久放后易生菌,建议重新配制后尝试。 还有一种可能就是样品的问题,蛋白变性,或蛋白溶液中长菌,建议使用新样品尝试。或者也可以使用同样的条件走BSA尝试,以排除柱子或缓冲液的问题。 |
2楼2012-09-28 08:57:36
padodo
至尊木虫 (职业作家)
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3楼2012-09-28 12:53:18
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,因为图谱跟不加巯基乙醇差别很大,理解不了,能不能进一步讲解一下,谢谢啦