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klxts

新虫 (初入文坛)

[求助] 各位毛细管电泳的师兄师姐好,哪位能帮帮忙

各位虫虫师兄师姐好,偶是用毛细管电泳测蛋白的,但是突然之间,检测出现了异常现象,基线不稳定,像锯齿状一样,这是为什么呢?

另外,为什么做蛋白非得用DTT或者β-巯基乙醇啊?能不能不用啊?他们到底是什么作用?很难闻耶,能不能不用啊?
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guanguancow

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
crity328: 金币+2, 感谢应助,欢迎常来~ 2012-09-28 09:01:34
DTT或者β-巯基乙醇是用来防止氧化的,蛋白中有容易被氧化的二硫键等。
异常现象,基线不稳定,像锯齿状一样,这样的问题你需要一点点排除问题。
我建议首先考察是否是蛋白吸附影响,即是否是柱子的问题,在用氢氧化钠冲洗柱后,用最稳定的硼砂缓冲液走DMSO,考察基线是否稳定。
如不是,可以考察是否是缓冲液问题,缓冲液配制久放后易生菌,建议重新配制后尝试。
还有一种可能就是样品的问题,蛋白变性,或蛋白溶液中长菌,建议使用新样品尝试。或者也可以使用同样的条件走BSA尝试,以排除柱子或缓冲液的问题。
2楼2012-09-28 08:57:36
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padodo

至尊木虫 (职业作家)

胖嘟嘟

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
soundhorizo: 金币+2, 您要常来 ^^ 2012-09-28 14:46:01
基线不稳,就换个毛细管吧,反正也很便宜
我有什么能帮助您的吗?
3楼2012-09-28 12:53:18
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klxts

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by guanguancow at 2012-09-28 08:57:36
DTT或者β-巯基乙醇是用来防止氧化的,蛋白中有容易被氧化的二硫键等。
异常现象,基线不稳定,像锯齿状一样,这样的问题你需要一点点排除问题。
我建议首先考察是否是蛋白吸附影响,即是否是柱子的问题,在用 ...

谢谢啦,好开心啊,又学到东西啦,谢谢谢谢
4楼2012-09-28 20:17:21
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klxts

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by guanguancow at 2012-09-28 08:57:36
DTT或者β-巯基乙醇是用来防止氧化的,蛋白中有容易被氧化的二硫键等。
异常现象,基线不稳定,像锯齿状一样,这样的问题你需要一点点排除问题。
我建议首先考察是否是蛋白吸附影响,即是否是柱子的问题,在用 ...

除了这两种物质,还有什么可以起到相同的作用吗?我的实验显示的结果让我感觉,巯基乙醇可以让蛋白质变性啊?当然只是猜测而已,因为图谱跟不加巯基乙醇差别很大,理解不了,能不能进一步讲解一下,谢谢啦
5楼2012-10-08 15:17:10
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zpplkq

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

巯基乙醇加少量是用来防止氧化的,加的过多就可以让蛋白质变性。
6楼2012-10-15 15:55:39
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吴娟

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by klxts at 2012-10-08 15:17:10
除了这两种物质,还有什么可以起到相同的作用吗?我的实验显示的结果让我感觉,巯基乙醇可以让蛋白质变性啊?当然只是猜测而已,因为图谱跟不加巯基乙醇差别很大,理解不了,能不能进一步讲解一下,谢谢啦...

巯基乙醇是让你的蛋白还原用的  打开二硫键     一般都是加热70度以上让蛋白变性
7楼2012-12-14 16:44:14
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931636060

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by guanguancow at 2012-09-28 08:57:36
DTT或者β-巯基乙醇是用来防止氧化的,蛋白中有容易被氧化的二硫键等。
异常现象,基线不稳定,像锯齿状一样,这样的问题你需要一点点排除问题。
我建议首先考察是否是蛋白吸附影响,即是否是柱子的问题,在用 ...

那蛋白质变形后,毛细管电泳的紫外谱图会不会有影响呢?
8楼2012-12-14 18:52:35
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太学清议

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by zpplkq at 2012-10-15 15:55:39
巯基乙醇加少量是用来防止氧化的,加的过多就可以让蛋白质变性。

你好,新注册的没办法发帖,有个问题想请教下,谢谢。实验部分已经完事,得到毛细管电泳峰图都是DAT文件,怎么处理这样图,应用到文章上??谢谢。
9楼2018-11-09 10:58:19
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