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寂寞又美好

金虫 (小有名气)

应助: 2 (幼儿园)
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专业: 细胞呼吸与代谢

[求助] RNA提取及电泳求助！已有2人参与

各位前辈们你们好，我最近提RNA（肌肉组织）总是260/280比值偏高，有的都超过2.1甚至是2.2了，跑琼脂糖凝胶电泳时5s特别亮，这是为什么啊，还有就是有的260/280比值在1.96左右时，RNA电泳是5S 还是很亮，希望在这方面有经验的大神好好讲解一下，不是很懂的或是不确定的就不要回复了。

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等待.....

1楼 2014-08-07 17:08:36

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

王平阳

金虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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gyesang: 金币+4, 鼓励交流！ 2014-08-09 21:26:50

正如二楼虫友所说，RNA降解比较严重。
原因分析：我前几天也提了一次RNA（动物组织），效果也不好，可能是夏天天气太热，各种酶（特别是RNase）活性比较高，加之操作的时候可能受到影响，提取用到的器材不净等因素影响，导致RNA降解比较厉害，理论上电泳之后应该是18S和28S比较亮的。
建议解决方案：对RNA提取器材（研钵、EP管、枪头（最好直接使用RNA枪头）等再次用DEPC水浸泡并灭菌），操作时严格佩戴手套口罩，整个提取过程开着空调，尽量使温度低一点，跑电泳时加大电压，缩短时间（建议使用200V跑十分钟），除了要求的室温放置，其他的尽量在冰盒中进行。
些许建议，仅作参考，祝好运