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寂寞又美好

金虫 (小有名气)

[求助] RNA提取及电泳求助! 已有2人参与

各位前辈们你们好,我最近提RNA(肌肉组织)总是260/280比值偏高,有的都超过2.1甚至是2.2了,跑琼脂糖凝胶电泳时5s特别亮,这是为什么啊,还有就是有的260/280比值在1.96左右时,RNA电泳是5S 还是很亮,希望在这方面有经验的大神好好讲解一下,不是很懂的或是不确定的就不要回复了。
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+4, 鼓励交流! 2014-08-09 21:26:50
正如二楼虫友所说,RNA降解比较严重。
原因分析:我前几天也提了一次RNA(动物组织),效果也不好,可能是夏天天气太热,各种酶(特别是RNase)活性比较高,加之操作的时候可能受到影响,提取用到的器材不净等因素影响,导致RNA降解比较厉害,理论上电泳之后应该是18S和28S比较亮的。
建议解决方案:对RNA提取器材(研钵、EP管、枪头(最好直接使用RNA枪头)等再次用DEPC水浸泡并灭菌),操作时严格佩戴手套口罩,整个提取过程开着空调,尽量使温度低一点,跑电泳时加大电压,缩短时间(建议使用200V跑十分钟),除了要求的室温放置,其他的尽量在冰盒中进行。
些许建议,仅作参考,祝好运
没有做不到,只有想不到!
3楼2014-08-09 09:44:49
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
确定的告诉你RNA存在降解
2楼2014-08-08 09:08:20
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ice-bamboo

木虫 (小有名气)

我也遇到相同的问题,请问前辈是否解决
生为科研
4楼2016-02-18 08:41:03
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