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sanguodalao铜虫 (正式写手)
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[求助]
请问平末端如何连接到载体上？ 已有2人参与
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我有一段电泳跑完的条带，但没有引物，所以无法测序，现在想把条带回收连接到载体上，再测载体的序。请问这条带如何连接到载体上？谢谢！ |
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2楼2014-08-05 18:33:11
【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
sanguodalao: 金币+10 2014-08-06 00:44:27
感谢参与，应助指数 +1
sanguodalao: 金币+10 2014-08-06 00:44:27
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你手上有什么载体？ 克隆载体pBluescript，pGEM-3z，pUC系列有吗？如果没有，找别人要，这些载体很容易要到。用EcoRV酶切开，平端连进去，蓝白斑筛选。推荐这种方法。 其他不能蓝白斑筛选的，能平端切开的载体，也行。平端连接自连率很高，筛选有点麻烦。将载体去磷酸化之后，能降低自连率，还是有点麻烦。 片段加A后，连T载体也是个方法，不过不是加Taq酶。PCR时普通Taq酶能在PCR产物3端加上一个A，但是对于DNA片段，就要用末端转移酶了。 |
3楼2014-08-05 21:23:33
sanguodalao
铜虫 (正式写手)
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4楼2014-08-06 00:44:17
5楼2014-08-06 06:56:42
6楼2014-08-06 11:57:19
7楼2014-08-06 12:14:41
