应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 腺病毒重组技术---重组的质粒怎么丢了？
51/1返回列表
查看: 1831  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

81631731

金虫 (小有名气)

[求助] 腺病毒重组技术---重组的质粒怎么丢了？ 已有1人参与

最近做腺病毒重组，频频遇到蹊跷的结果，比如这两天：穿梭质粒筛选没问题，后转BJ5183-AD-1同源重组，鉴定结果也没问题，之后就转XL-10gold大量扩增......问题就出来了，扩增后提质粒，跑胶结果（未经pacI酶切）很奇葩，本来扩增前酶切结果是有23KD和4500bp条带的，没有酶切的话至少比23KD大的，但是结果只看到4500bp的条带，敢问大神可知道重组的质粒哪去了？？？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
要有梦想，即使遥远~
1楼 2014-08-04 18:10:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

81631731

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by sarah-miao at 2014-08-05 19:49:47
两个是同样的载体么？载体不同可能在不同的菌中生长情况也不一样的，你那你这个重组的空白质粒试试看看，提质粒有没有，如果没有，那就是加入片段后造成的了...

两种载体都是一样的。我把筛选出来的重组质粒pac I酶切了跑胶没问题，就没有扩增了，先这样转293吧。暂时不晓得问题出在哪里。。。今天下午还要提3个扩增的重组质粒，看看情况。
赞一下 回复此楼
要有梦想，即使遥远~
7楼2014-08-06 15:30:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你重新在提纯一次看看吧。可能问题出在扩增上。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2014-08-05 01:17:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

81631731

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-08-05 01:17:37
你重新在提纯一次看看吧。可能问题出在扩增上。

恩恩，确实问题出在扩增上，可是就是纳闷扩增环节怎么还会出错，转化了两次都是这样，第一次用的以前的XL-10GOLD，后来又重新做了一批感受态，还是这样，而且同时还做了另一个重组质粒的扩增，提取也是同步的，另外一个都没问题，这个提取的过程中，醋酸钠/乙醇沉淀的时候，看没有絮状沉淀，就怀疑有问题，跑胶果然。。。
赞一下 回复此楼
要有梦想，即使遥远~
3楼2014-08-05 14:52:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
81631731: 金币+1, 谢谢帮助！~ 2014-08-05 18:01:27
引用回帖:
3楼: Originally posted by 81631731 at 2014-08-05 14:52:26
恩恩，确实问题出在扩增上，可是就是纳闷扩增环节怎么还会出错，转化了两次都是这样，第一次用的以前的XL-10GOLD，后来又重新做了一批感受态，还是这样，而且同时还做了另一个重组质粒的扩增，提取也是同步的，另外 ...

是不是菌出问题了，你用感受态同时转化空质粒和构建成功的质粒，然后提质粒看看怎样的结果
赞一下 回复此楼
4楼2014-08-05 15:21:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854电子信息求调剂 +3 α____ 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:28 by zhq0425
[考研] 石河子大学（211、双一流）硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
[考研] 269专硕求调剂 +6 金恩贝 2026-03-21 6/300 2026-03-22 14:31 by ColorlessPI
[考研] 一志愿070300浙大化学358分，求调剂！ +3 酥酥鱼.. 2026-03-21 3/150 2026-03-22 11:31 by 杨杨杨紫
[考研] 316求调剂 +6 梁茜雯 2026-03-19 6/300 2026-03-21 06:32 by Ecowxq666！
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +4 llllkkkhh 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:24 by JourneyLucky
[考研] 350求调剂 +5 weudhdk 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:04 by luoyongfeng
[考研] 08工学调剂 +5 用户573181 2026-03-20 5/250 2026-03-20 15:47 by xia_2003
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 生物学调剂招人！！！ +3 山海天岚 2026-03-17 4/200 2026-03-19 21:34 by 怎么释怀
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +10 慕寒mio 2026-03-16 10/500 2026-03-19 15:26 by 丁丁*
[考研] 材料与化工求调剂 +7 为学666 2026-03-16 7/350 2026-03-19 14:48 by 尽舜尧1
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +10 llllkkkhh 2026-03-18 12/600 2026-03-19 14:33 by llllkkkhh
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +4 生物工程调剂 2026-03-16 12/600 2026-03-19 11:10 by 生物工程调剂
[考研] 085601专硕，总分342求调剂，地区不限 +5 share_joy 2026-03-16 5/250 2026-03-18 14:48 by haxia
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨； 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭