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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 腺病毒重组技术---重组的质粒怎么丢了？
汕头大学海洋科学接受调剂
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81631731

金虫 (小有名气)

[求助] 腺病毒重组技术---重组的质粒怎么丢了？ 已有1人参与

最近做腺病毒重组，频频遇到蹊跷的结果，比如这两天：穿梭质粒筛选没问题，后转BJ5183-AD-1同源重组，鉴定结果也没问题，之后就转XL-10gold大量扩增......问题就出来了，扩增后提质粒，跑胶结果（未经pacI酶切）很奇葩，本来扩增前酶切结果是有23KD和4500bp条带的，没有酶切的话至少比23KD大的，但是结果只看到4500bp的条带，敢问大神可知道重组的质粒哪去了？？？
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要有梦想，即使遥远~
1楼 2014-08-04 18:10:07
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
81631731: 金币+1, 谢谢帮助！~ 2014-08-22 09:18:49
引用回帖:
5楼: Originally posted by 81631731 at 2014-08-05 17:45:37
当时同时做了两个重组，其中一个扩增完都没问题，另一个就出现这样的情况。。。所以，没有考虑菌出问题。...

两个是同样的载体么？载体不同可能在不同的菌中生长情况也不一样的，你那你这个重组的空白质粒试试看看，提质粒有没有，如果没有，那就是加入片段后造成的了
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6楼2014-08-05 19:49:47
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你重新在提纯一次看看吧。可能问题出在扩增上。
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2楼2014-08-05 01:17:37
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81631731

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-08-05 01:17:37
你重新在提纯一次看看吧。可能问题出在扩增上。

恩恩，确实问题出在扩增上，可是就是纳闷扩增环节怎么还会出错，转化了两次都是这样，第一次用的以前的XL-10GOLD，后来又重新做了一批感受态，还是这样，而且同时还做了另一个重组质粒的扩增，提取也是同步的，另外一个都没问题，这个提取的过程中，醋酸钠/乙醇沉淀的时候，看没有絮状沉淀，就怀疑有问题，跑胶果然。。。
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要有梦想，即使遥远~
3楼2014-08-05 14:52:26
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
81631731: 金币+1, 谢谢帮助！~ 2014-08-05 18:01:27
引用回帖:
3楼: Originally posted by 81631731 at 2014-08-05 14:52:26
恩恩，确实问题出在扩增上，可是就是纳闷扩增环节怎么还会出错，转化了两次都是这样，第一次用的以前的XL-10GOLD，后来又重新做了一批感受态，还是这样，而且同时还做了另一个重组质粒的扩增，提取也是同步的，另外 ...

是不是菌出问题了，你用感受态同时转化空质粒和构建成功的质粒，然后提质粒看看怎样的结果
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4楼2014-08-05 15:21:03
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