应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 加了酶切位点和保护碱基的引物Tm值计算及PCR问题。急急急
51/1返回列表
查看: 3937  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

北化方华

铁虫 (初入文坛)

[求助] 加了酶切位点和保护碱基的引物Tm值计算及PCR问题。急急急 已有7人参与

加了酶切位点和保护碱基后tm值增加了30度，本身引物就50度了，而且长度很短15bp左右，做过各种梯度和分布PCR，P出来的时候很少很少，加了GCbuffer或者DMSO后也没P出来，跑胶都是非特性性条带，一大条的涂带那种，现在想试下touch down，不知道用哪个Tm值设置，好忧伤。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-08-04 15:12:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-08-04 17:09:22
加入酶切位点和保护碱基之后，计算引物的Tm值时不受影响的，只计算跟模板序列结合的那段引物序列的Tm就可以了
赞一下 回复此楼
rainwater
4楼2014-08-04 16:09:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答

songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-08-04 17:09:07
北化方华: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-08-05 17:40:46
妹子 我支你一招 你先不加酶切位点和保护碱基去扩增，P出目的条带后，回收做模板再用加酶切位点和保护碱基的引物再扩一遍
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2014-08-04 15:44:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

北化方华

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by songzuowei at 2014-08-04 15:44:06
妹子 我支你一招 你先不加酶切位点和保护碱基去扩增，P出目的条带后，回收做模板再用加酶切位点和保护碱基的引物再扩一遍

这样可以吗，那之后用啥温度扩增呢
赞一下 回复此楼
3楼2014-08-04 16:09:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

北化方华

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-08-04 16:09:59
加入酶切位点和保护碱基之后，计算引物的Tm值时不受影响的，只计算跟模板序列结合的那段引物序列的Tm就可以了

看网上有的这样说，前几个循环酶切位点不参与解链，后来的循环是参与其中的，应该算上。
赞一下 回复此楼
5楼2014-08-04 16:19:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 271求调剂 +11 生如夏花… 2026-03-11 13/650 2026-03-17 09:02 by 雾散后相遇lc
[考研] [复试调剂]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 286求调剂 +3 lemonzzn 2026-03-16 5/250 2026-03-16 20:43 by lemonzzn
[考研] 材料专硕306英一数二 +4 z1z2z3879 2026-03-16 6/300 2026-03-16 19:38 by z1z2z3879
[考研] 化学调剂0703 +8 啊我我的 2026-03-11 8/400 2026-03-16 17:23 by 我的船我的海
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 材料与化工一志愿南昌大学327求调剂推荐 +7 Ncdx123456 2026-03-13 8/400 2026-03-16 12:15 by karry wen
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 5/250 2026-03-14 16:30 by JourneyLucky
[考研] 一志愿湖师大化学289求调剂 +6 XMCMM3.14159 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:28 by JourneyLucky
[考研] 26考研调剂 +3 ying123. 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:18 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 Dizzy123@ 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:02 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕288分求调剂 一志愿211 +4 在家想你 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:49 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工求调剂一志愿 985 总分 295 +8 dream…… 2026-03-12 8/400 2026-03-13 22:17 by 星空星月
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-12 5/250 2026-03-13 15:56 by 棒棒球手
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +4 薛云鹏 2026-03-13 4/200 2026-03-13 10:40 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂材料专硕293 +6 段_(:з」∠)_ 2026-03-10 6/300 2026-03-10 18:22 by ms629
[考研] 0703化学调剂 +3 三dd. 2026-03-10 3/150 2026-03-10 15:45 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭