| 查看: 1482 | 回复: 7 | |||
worm2010金虫 (小有名气)
|
[交流]
【求助/交流】引物设计的问题，大侠们来帮帮忙~谢谢了 已有4人参与
|
| 用oligo6设计引物后，假如还想在这对引物两侧各加一个酶切位点的话，会不会影响最初设计的退火温度以及二聚体产生呢？如果影响怎么办呀？应该怎么设计呢？大家来讨论一下吧，我是菜鸟啊，最近PCR总也P不出东西来，郁闷死了 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有86人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助-基因克隆及引物设计的问题
已经有6人回复
- 引物设计的问题
已经有13人回复
- 原核表达引物设计的问题
已经有6人回复
- 求帮忙分析下菌液PCR检测结果
已经有19人回复
- 引物设计的问题
已经有6人回复
- 琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物出现杂带
已经有16人回复
- 请教引物设计的问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】加急~~~求助：关于基因克隆与表达引物设计的问题！希望高人指点！
已经有3人回复
- 【求助/交流】热不对称PCR的问题，回帖就送金币！！多谢帮忙回答的，帮顶的！！
已经有49人回复
- 【求助/交流】请教各位一个定量PCR引物设计的问题，谢谢啦
已经有3人回复
- 【求助/交流】Real time RT-PCR 引物设计问题（高悬赏请高手帮忙）
已经有28人回复
- 急求：构建载体时引物设计的问题
已经有7人回复
scelab
荣誉版主 (文坛精英)
小木虫之有关部门负责人
- 应助: 63 (初中生)
- 贵宾: 1.475
- 金币: 8294.6
- 散金: 4158
- 红花: 39
- 沙发: 99
- 帖子: 21277
- 在线: 3169.3小时
- 虫号: 482065
- 注册: 2007-12-20
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
2楼2010-11-25 23:23:21
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16332.8
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3652
- 在线: 289小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
3楼2010-11-25 23:23:25
worm2010
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 5172.4
- 散金: 8
- 帖子: 163
- 在线: 59.6小时
- 虫号: 1047693
- 注册: 2010-06-26
- 专业: 原子和分子物理
4楼2010-11-26 08:40:42
worm2010
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 5172.4
- 散金: 8
- 帖子: 163
- 在线: 59.6小时
- 虫号: 1047693
- 注册: 2010-06-26
- 专业: 原子和分子物理
5楼2010-11-26 08:42:16
fjt198719
木虫 (著名写手)
永远的菜鸟
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1871.3
- 散金: 931
- 红花: 4
- 沙发: 17
- 帖子: 1283
- 在线: 383小时
- 虫号: 1088222
- 注册: 2010-09-03
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传育种学
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):辛苦，好多字 2010-11-26 09:45:34
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):辛苦，好多字 2010-11-26 09:45:34
|
普通PCR的话，建议LZ做个Touchdown PCR，找到最佳退火温度来扩增，一般与软件和合成引物单上写的没啥关系。 本人从来不计算TM值，因为一般都是直接把目的基因全部扩增出来，设计引物都是直接手写，酶切位点当然要用软件分析下才选择的（载体上有，目的基因上无，双酶切效果好点的），扩增200-3000片段全部没得问题。SOE-PCR也没的问题，就是直接融合5个片段也没的问题，设计的中间融合引物都是50bp跟30bp的引物一起扩增，刚刚的（这里引物合成单上写的50bp的引物退火温度都是80度左右，30bp的是65左右，而我扩增的退火温度是57度，可以看出来单子上写的没用）。 本人粗略认为退火温度只与目的菌株的GC含量有关 |
6楼2010-11-26 09:44:37
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16332.8
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3652
- 在线: 289小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
7楼2010-11-26 11:31:45
worm2010
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 5172.4
- 散金: 8
- 帖子: 163
- 在线: 59.6小时
- 虫号: 1047693
- 注册: 2010-06-26
- 专业: 原子和分子物理
8楼2010-11-26 14:50:44
