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worm2010

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】引物设计的问题,大侠们来帮帮忙~谢谢了已有4人参与

用oligo6设计引物后,假如还想在这对引物两侧各加一个酶切位点的话,会不会影响最初设计的退火温度以及二聚体产生呢?如果影响怎么办呀?应该怎么设计呢?大家来讨论一下吧,我是菜鸟啊,最近PCR总也P不出东西来,郁闷死了
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天使托

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T.Shen

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):鼓励交流,欢迎常来 2010-11-26 09:34:25
什么叫还想再添加酶切位点?一般用软件分析之后,软件会给出适合条件的一对引物,他们的GC和Tm值都相差很小,然后再添加酶切位点,保护碱基,最后再分析单条链以及双链!不知道楼主明白否?
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2010-11-25 23:23:25
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天使托

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T.Shen


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by worm2010 at 2010-11-26 08:42:16:

嗯嗯,大概明白你的意思了,但是“最后再分析单条链以及双链”是把加了酶切位点和保护碱基的一对引物拿到oligo里面分析吗?

是啊,就是加了酶切位点和保护碱基之后再分别进行单链和双链分析的!
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
7楼2010-11-26 11:31:45
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