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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】引物设计的问题，大侠们来帮帮忙~谢谢了
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worm2010

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】引物设计的问题，大侠们来帮帮忙~谢谢了 已有4人参与

用oligo6设计引物后，假如还想在这对引物两侧各加一个酶切位点的话，会不会影响最初设计的退火温度以及二聚体产生呢？如果影响怎么办呀？应该怎么设计呢？大家来讨论一下吧，我是菜鸟啊，最近PCR总也P不出东西来，郁闷死了
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1楼 2010-11-25 22:04:54
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worm2010

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by fjt198719 at 2010-11-26 09:44:37:
普通PCR的话，建议LZ做个Touchdown PCR，找到最佳退火温度来扩增，一般与软件和合成引物单上写的没啥关系。
本人从来不计算TM值，因为一般都是直接把目的基因全部扩增出来，设计引物都是直接手写，酶切位点当然要 ...

很受用，谢谢啦！
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8楼2010-11-26 14:50:44
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):热心~ 2010-11-26 09:33:57
基本无影响~~~
p不出来原因很多，别往引物上死扣啊
做足够切当的对照，一定能找到扩不出来的原因的
赞一下(2人) 回复此楼
小木虫之有关部门负责人
2楼2010-11-25 23:23:21
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):鼓励交流，欢迎常来 2010-11-26 09:34:25
什么叫还想再添加酶切位点？一般用软件分析之后，软件会给出适合条件的一对引物，他们的GC和Tm值都相差很小，然后再添加酶切位点，保护碱基，最后再分析单条链以及双链！不知道楼主明白否？
赞一下(2人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2010-11-25 23:23:25
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worm2010

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by scelab at 2010-11-25 23:23:21:
基本无影响~~~
p不出来原因很多，别往引物上死扣啊
做足够切当的对照，一定能找到扩不出来的原因的

谢谢你给我的建议！
赞一下 回复此楼
4楼2010-11-26 08:40:42
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