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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » SSR筛引物过程中PAGE检测PCR产物出现诡异条带求指点。
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随风追梦

木虫 (正式写手)

[求助] SSR筛引物过程中PAGE检测PCR产物出现诡异条带求指点。 已有2人参与

在进行PAGE时候胶这两天出了几次没法解释的问题，请赐教。
同样的胶（8%PAGE）、同样的电泳时间电压（恒压）电流、同样的样品，为什么会出现这种差异呢？
唯一存在差别的地方就是出问题的胶都是利用刚配好的胶母液制的，然后过段时间利用同样的胶母液再制胶电泳就没问题了，难道真是这个原因？

SSR筛引物过程中PAGE检测PCR产物出现诡异条带求指点。
稍微好点


SSR筛引物过程中PAGE检测PCR产物出现诡异条带求指点。-1
坏1


SSR筛引物过程中PAGE检测PCR产物出现诡异条带求指点。-2
坏2
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初心不改！
1楼 2014-07-24 22:55:24
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幺哥撸啊撸

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-27 19:20:52
你是上午PCR下午电泳么? 这两者之间不能像个太长。然后就是胶和TBE最好一星期内用完，常换新的跑电泳，TBE用个4次就差不多可以换了。胶版没刷赶紧，你可以试试换新Taq酶再做一次。
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2楼2014-07-27 14:40:45
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幺哥撸啊撸

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-27 19:20:59
主要还是胶没做好 Marker都没跑出来
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3楼2014-07-27 14:42:02
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lumy790101

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 幺哥撸啊撸 at 2014-07-27 14:42:02
主要还是胶没做好 Marker都没跑出来

应该不是胶的问题， 我也出现类似的情况，还应该是体系哪有问题，但一直没找出来问题所在。你的样品、体系、程序每次都是一样的吗？
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4楼2014-07-28 14:25:48
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liuzhen2008

捐助贵宾 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
5楼2014-08-14 09:23:24
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随风追梦

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 幺哥撸啊撸 at 2014-07-27 14:40:45
你是上午PCR下午电泳么? 这两者之间不能像个太长。然后就是胶和TBE最好一星期内用完，常换新的跑电泳，TBE用个4次就差不多可以换了。胶版没刷赶紧，你可以试试换新Taq酶再做一次。

问题已解决，应该是胶母液没混匀，新配的胶母液放置5小时问题就没有了，重复验证了几次，应该是这个问题。谢谢你之前的热情回答。
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初心不改！
6楼2014-08-19 21:45:47
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随风追梦

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 幺哥撸啊撸 at 2014-07-27 14:42:02
主要还是胶没做好 Marker都没跑出来

问题已解决，应该是胶母液没混匀，新配的胶母液放置5小时问题就没有了，重复验证了几次，应该是这个问题。谢谢你之前的热情回答。
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初心不改！
7楼2014-08-19 21:46:08
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随风追梦

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lumy790101 at 2014-07-28 14:25:48
应该不是胶的问题， 我也出现类似的情况，还应该是体系哪有问题，但一直没找出来问题所在。你的样品、体系、程序每次都是一样的吗？...

问题已解决，应该是胶母液没混匀，新配的胶母液放置5小时问题就没有了，重复验证了几次，应该是这个问题。谢谢你之前的热情回答。
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初心不改！
8楼2014-08-19 21:46:31
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