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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 双重荧光定量PCR同管反应，其引物和探针的设计需要考虑哪些问题呢？
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胡琴HuQin

新虫 (小有名气)

[求助] 双重荧光定量PCR同管反应，其引物和探针的设计需要考虑哪些问题呢？ 已有3人参与

我最近在做双重荧光定量RT-PCR实验，需要在同一管中反应。这样的话，就会有两对引物和两条探针在同一体系中同时反应。我想知道这些引物和探针之间会不会相互干扰相互反应呢？如果会的话，在引物和探针的设计上应该注意什么问题呢？  求指点！谢谢了！
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1楼 2014-03-04 13:26:53
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
胡琴HuQin(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-03-04 19:59:29
首先要考虑扩增的位置，然后是扩增的程序。
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学习使你立于不败之地
2楼2014-03-04 14:52:15
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胡琴HuQin

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuren2009 at 2014-03-04 14:52:15
首先要考虑扩增的位置，然后是扩增的程序。

要考虑两对引物及两条探针这六条链之间的存在的互补配对问题吗？
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3楼2014-03-04 20:35:50
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

应该还有模版需要考虑
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学习使你立于不败之地
4楼2014-03-04 22:00:36
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胡琴HuQin

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yuren2009 at 2014-03-04 22:00:36
应该还有模版需要考虑

具体要考虑它们的哪些方面呢？主要是我对这个比较茫然~
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5楼2014-03-05 07:56:30
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donwenjun

新虫 (初入文坛)
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2014-06-15 21:16:01
要考虑两对引物及两条探针这六条链之间的存在的互补配对问题吗？
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为了学习而努力奋斗
6楼2014-06-15 19:55:51
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_深海渔_

金虫 (小有名气)
准备着手做

[ 发自小木虫客户端 ]
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7楼2014-06-18 00:46:52
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

主要考虑扩增产物会不会有交叉影响（引物特异性好就不存在这个问题），其次是几对引物之间的二聚体，探针的特异性一定要好。
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8楼2014-06-18 12:31:30
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