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xyq145058

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
帖子: 2
在线: 15分钟
虫号: 1867092
注册: 2012-06-22

[求助] 染色体PCR无法P出目的基因已有1人参与

正确提取的细菌的染色体，taq酶用的KOD puls neo和QUICK taq，都P不出东西，是不是引物的问题，求大神指教。另外，两个引物的5’端都要加一段酶切位点，分别是ECO R1和SAL1，但不是染色体模板的互谱序列，这样对PCR是否有影响？上下引物的tm值都是51℃左右，PCR条件是按说明书来的。是不是还要加保护碱基？

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1楼 2014-06-23 10:07:19

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

zhangyunjing

金虫 (小有名气)

应助: 72 (初中生)
金币: 1513.9
红花: 7
帖子: 202
在线: 164.5小时
虫号: 1952690
注册: 2012-08-23
性别: MM
专业: 理论法学

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-23 17:28:40

引物的Tm值太低了，酶切位点不影响PCR效果，可能的原因是引物不好

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rainwater

2楼2014-06-23 16:49:07