| 查看: 1394 | 回复: 4 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
649436583铜虫 (初入文坛)
|
[求助]
提取大肠杆菌质粒 已有2人参与
|
|||
首先我从高中毕业后再没接触过生物，对什么质粒、大肠杆菌是什么怎么做完全不清楚，公司老板分配给我的任务是用天根小提中量试剂盒提取大肠杆菌质粒，我全是从网上找的方法，希望各位大神帮帮忙我应该注意些什么，怎么操作。。。  先是配制LB培养基然后加氨苄青霉素，公司买的是生工的菌液加进去，昨天下午3点在摇床上开始震荡，接下来收集细菌和以下的步骤完全看不懂了，希望大神们通俗讲解一下。考虑到明后两天是周末，如果周一再做的话，今天需要怎么处理 拜谢各位  |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有102人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 大肠杆菌培养 质粒提取后困惑
已经有16人回复
- 大肠杆菌 4度保存 基因突变
已经有6人回复
- 细菌质粒提取浓度太低求助
已经有29人回复
- 大肠杆菌感受态细胞
已经有5人回复
- 大肠杆菌三个质粒共转化问题
已经有3人回复
- 摇的转化到大肠杆菌的质粒有沉淀
已经有20人回复
- 急求 多谢 关于大肠杆菌菌体总蛋白的提取
已经有5人回复
- 质粒导入大肠杆菌导不进去，求高手指点
已经有16人回复
- 本来带有质粒的大肠杆菌再对它进行一次质粒转化能达到增加质粒拷贝数的目的吗？
已经有10人回复
- 如何把质粒转入大肠杆菌中？
已经有13人回复
- 【求助/交流】求pMG36e质粒？或者其他的可用于大肠杆菌和乳酸菌的穿梭载体
已经有4人回复
- 大肠杆菌ET12567
已经有8人回复
- 求助：大肠杆菌基因组的提取
已经有6人回复
- 质粒导入大肠杆菌
已经有9人回复
- 提取大肠杆菌质粒失败的原因
已经有11人回复
- 如何提取农杆菌质粒
已经有11人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌转化质粒，出来的不是我要的了，怎么回事？
已经有13人回复
- 【求助/交流】提取大肠杆菌质粒时，所用的大肠杆菌菌液在4°C可以保存多长时间?
已经有9人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌菌液，如何再扩增？
已经有13人回复
- 【求助/交流】我用菌液摇菌抽提质粒浓度很低，请大家帮忙解决下，为什么
已经有16人回复
- 【求助/交流】酿酒酵母质粒转化大肠杆菌
已经有11人回复
- 【求助/交流】寻高手解答：提取质粒老是降解怎么回事？
已经有12人回复
大懒猫很懒
金虫 (小有名气)
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 1445.3
- 红花: 4
- 帖子: 190
- 在线: 25.4小时
- 虫号: 2473804
- 注册: 2013-05-20
- 性别: GG
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
4楼2014-06-20 15:30:31
飞约疯人院
专家顾问 (著名写手)
科学怪人
-
专家经验: +140 - MolEPI: 2
- 应助: 308 (大学生)
- 金币: 1079.5
- 散金: 8294
- 红花: 65
- 沙发: 5
- 帖子: 1996
- 在线: 266.1小时
- 虫号: 3188421
- 注册: 2014-05-07
- 专业: 生物化学
- 管辖: 分子生物
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
649436583(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-06-20 10:27:34
感谢参与，应助指数 +1
649436583(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-06-20 10:27:34
|
(一)细菌的收获和裂解 1.收获 1)将2ml含相应抗生素的LB加入到容量为15ml 并通气良好(不盖紧)的试管中，然后接入一单菌落，于30℃剧烈振摇下培养过夜。 2)将1.5ml培养物倒入微量离心管中，用微量离心机于4℃以12000g离心30秒，将剩余的培养物贮存于4℃。 3)吸去培养液，使细菌沉淀尽可能干燥。除去上清的简便方法是用一次性使用的吸头与真空管道相连，轻缓抽吸，并用吸头接触液面。当液体从管中吸出时，尽可能使吸头远离细菌沉淀，然后继续用吸头通过抽真空除去附于管壁的液滴。 2.碱裂解法 1)将细菌沉淀，所得重悬于100μl用冰预冷的溶液I中，剧烈振荡。 溶液I 50mmol/L葡萄糖 25mmol/L Tris.Cl(pH8.0) 10mmol/LEDTA(pH8.0) 溶液I可成批配制，每瓶约100ml，在10lbf/in2(6.895×104Pa)高压下蒸气灭菌15分钟，贮存于4℃。须确使细菌沉淀在溶液I中完全分散，将两个微量离心管的管底部互相接触震荡，可使沉淀迅速分散。 |
2楼2014-06-20 10:12:03
|
|
3楼2014-06-20 11:51:12
鬼羽帝魂
木虫 (著名写手)
- 应助: 183 (高中生)
- 金币: 3100.2
- 散金: 19
- 红花: 12
- 帖子: 1427
- 在线: 186.8小时
- 虫号: 2538789
- 注册: 2013-07-09
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
649436583(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-06-20 16:41:21
感谢参与，应助指数 +1
649436583(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-06-20 16:41:21
|
昨天下午摇菌的啊，现在已经提了吧。 1.摇菌。 2.用2mlEP管收集菌液，12000g离心1min。弃上清，加溶液一。 3.涡旋混匀，不要有菌块。加溶液二，轻轻上下混匀8次左右。 3.加溶液三轻轻上下混匀8次左右。 4.12000g离心10min。 5.将上清过柱子，12000g离心30s。 6.加W1洗一次，加W2洗二次。 7.空离心，12000g离心1min。 8.加65度预热的Euent30ul溶解。 9.电泳检测浓度。 各试剂盒步骤应该大体差不多，所加溶液多少可能会有区别，请参照说明书。 纯个人操作方法，纯手打。 |
5楼2014-06-20 16:04:50
