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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 可溶性蛋白在沉淀里面，不在上清液肿么办啊
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知之为知之a

新虫 (初入文坛)

[求助] 可溶性蛋白在沉淀里面，不在上清液肿么办啊 已有10人参与

做了好几次SDS-PAGE，设计的可溶性蛋白经过细胞破碎后，只发现在下层沉淀里面有表达的诱导蛋白，诱导温度30摄氏度，IPTG浓度0.5mM.时间5个小时。
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知之为知之
1楼 2014-06-18 08:19:30
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
降低温度到18度，IPTG降低到0.1mM, 过夜诱导试试看？
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2014-06-18 21:46:46
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普通回帖

anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
低温过夜诱导，在诱导前将对数期的菌液10到15℃预冷半小时试试
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爱拼才会赢
3楼2014-06-20 22:27:32
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sqd767019087

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
裂解buffer  ph   诱导温度 诱导od  菌有么有破碎完全

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2014-06-21 00:18:48
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exon2002

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
两个办法：第一，助溶，改变生产和溶解条件，使原来不溶变成溶；第二，变性蛋白收集，然后复性。
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5楼2014-06-21 06:32:45
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duanjifu520

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我觉得应该是溶液环境造成了蛋白的沉淀 你可以试试改变下 例如ph 可以直接在细胞破碎后的混液体中加入微酸或弱碱试试。或者是其中含有某种较高浓度的蛋白沉淀剂 多分析慢慢排除吧

[ 发自小木虫客户端 ]
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6楼2014-06-21 13:47:55
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馒头爱生物

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

先低温过夜诱导，降低IPTG浓度，看看能否在上清中表达。
实在不行就采用第二招，溶解包涵体吧
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7楼2014-06-23 16:10:59
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bly861

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我觉得很有可能是形成了包涵体，培养温度过高，蛋白大量表达形成包涵体，可以降低培养温度试试，18摄氏度诱导过夜
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8楼2014-06-24 15:01:36
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kindlin

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你可以在加入诱导剂前将菌摇至OD=1，加入IPTG后16度过夜诱导试试
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9楼2014-06-24 20:31:54
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danchai

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

也可以通过破碎时缓冲液的pH值、盐浓度的变化及变性剂的引入使目的蛋白可溶。
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10楼2014-06-25 16:48:22
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