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知之为知之a

新虫 (初入文坛)

[求助] 可溶性蛋白在沉淀里面,不在上清液肿么办啊 已有10人参与

做了好几次SDS-PAGE,设计的可溶性蛋白经过细胞破碎后,只发现在下层沉淀里面有表达的诱导蛋白,诱导温度30摄氏度,IPTG浓度0.5mM.时间5个小时。
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知之为知之
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馒头爱生物

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

先低温过夜诱导,降低IPTG浓度,看看能否在上清中表达。
实在不行就采用第二招,溶解包涵体吧
7楼2014-06-23 16:10:59
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查看全部 12 个回答

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
降低温度到18度,IPTG降低到0.1mM, 过夜诱导试试看?
行至水穷处,坐看云起时
2楼2014-06-18 21:46:46
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
低温过夜诱导,在诱导前将对数期的菌液10到15℃预冷半小时试试
爱拼才会赢
3楼2014-06-20 22:27:32
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sqd767019087

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
裂解buffer  ph   诱导温度 诱导od  菌有么有破碎完全

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-06-21 00:18:48
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