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知之为知之a

新虫 (初入文坛)

[求助] 可溶性蛋白在沉淀里面,不在上清液肿么办啊 已有10人参与

做了好几次SDS-PAGE,设计的可溶性蛋白经过细胞破碎后,只发现在下层沉淀里面有表达的诱导蛋白,诱导温度30摄氏度,IPTG浓度0.5mM.时间5个小时。
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知之为知之
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duanjifu520

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我觉得应该是溶液环境造成了蛋白的沉淀 你可以试试改变下 例如ph 可以直接在细胞破碎后的混液体中加入微酸或弱碱试试。或者是其中含有某种较高浓度的蛋白沉淀剂 多分析慢慢排除吧

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2014-06-21 13:47:55
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查看全部 12 个回答

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
降低温度到18度,IPTG降低到0.1mM, 过夜诱导试试看?
行至水穷处,坐看云起时
2楼2014-06-18 21:46:46
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
低温过夜诱导,在诱导前将对数期的菌液10到15℃预冷半小时试试
爱拼才会赢
3楼2014-06-20 22:27:32
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sqd767019087

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
裂解buffer  ph   诱导温度 诱导od  菌有么有破碎完全

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-06-21 00:18:48
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