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所谓医人z

铜虫 (初入文坛)

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[求助] 新手求助关于逆转录PCR问题已有3人参与

在下本科生一名，刚刚开始做创新实验，实验方法设计逆转录PCR等。想请教一下大侠们关于引物设计相关问题。
用primer 设计软件设计出来的上下游引物按道理应该是一个与已知mRNA相应序列互补，一个与已知mRNA相应序列相同吧？那么最后扩增的cDNA序列一半与已知mRNA相同，一半与已知mRNA互补吧？但是将PCR产物测序结果拿到NCBI进行BLAST后发现，上下游序列都是一样的呀？请各位前辈指导！拜谢

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1楼2014-06-08 00:16:24

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引用回帖:

4楼: Originally posted by Lau_Kimura at 2014-06-08 02:13:07
逆转录使用的是随机引物，一种长度为 6~10 个核苷酸，由 4 种碱基随机组成的 DNA 片段。它们可以在 mRNA 的不同位点结合，合成的产物也是 RNA-DNA 的杂交体。这种杂交体一般不能构建载体，必须把这种杂交体中的 RNA ...

也就是说，逆转录以后做PCR扩增时，它的扩增模板有两条链？

[ 发自小木虫客户端 ]