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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » race的实验 胶回收
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答案24

木虫 (初入文坛)

高中

[求助] race的实验 胶回收 已有4人参与

我最近在做race的实验，巢式pcr结束后，虽然说是模带，但是目的带还是挺清晰的。再对pcr产物进行胶回收DNA后，经1.2%的胶检测后。dna为什么都没有了？
ps:胶回收时点样50微升   
下图是25微升体系P的结果： marker左边是5‘（目的片段大小200左右），右边是3’（目的片段大小500左右）

race的实验  胶回收
2014-05-23 1图.jpg
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认真仔细乐观的对待每一天
1楼 2014-05-27 16:17:50
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XOooZzz

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fanbobecky at 2014-06-16 09:11:48
请问如果我的pcr体系是20ul，电泳检测的时候点多少样合适啊？...

看你的电泳检测是要做什么用。
要检测后切胶回收做后续实验的，留2uL以防万一就够了。
只是看看PCR效果的，取2～3uL电泳就够了。

RACE条带不单一很正常。可以把个条带都切出来测序看看。
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5楼2014-06-16 14:23:00
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-05-27 18:56:24
楼主
首先，RACE的产物50ul怎么能全点呢，留一点可以接着用这个产物PCR，那条带就会像电灯泡一样亮；
然后，你这个电泳条带不是很亮，胶回收损失率会达到80%，回收回来的只有2-50ng/ul而已；
最后，建议用Qiagen公司的 PCR purification Kit试剂盒，直接将PCR产物回收即可，回收率达到90%以上
谢谢！
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
2楼2014-05-27 16:50:12
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fanbobecky

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-05-27 16:50:12
楼主
首先，RACE的产物50ul怎么能全点呢，留一点可以接着用这个产物PCR，那条带就会像电灯泡一样亮；
然后，你这个电泳条带不是很亮，胶回收损失率会达到80%，回收回来的只有2-50ng/ul而已；
最后，建议用Qiagen ...

请问如果我的pcr体系是20ul，电泳检测的时候点多少样合适啊？
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3楼2014-06-16 09:11:48
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-06-17 11:40:48
从图上看，你没有获得单一目的条带，很有可能引物设计的不够理想哦

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2014-06-16 09:58:33
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