24小时热门版块排行榜    

查看: 1383  |  回复: 6

答案24

木虫 (初入文坛)

高中

[求助] race的实验 胶回收 已有4人参与

我最近在做race的实验,巢式pcr结束后,虽然说是模带,但是目的带还是挺清晰的。再对pcr产物进行胶回收DNA后,经1.2%的胶检测后。dna为什么都没有了?
ps:胶回收时点样50微升   
下图是25微升体系P的结果: marker左边是5‘(目的片段大小200左右),右边是3’(目的片段大小500左右)

race的实验  胶回收
2014-05-23 1图.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

认真仔细乐观的对待每一天
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流! 2014-05-27 18:56:24
楼主
首先,RACE的产物50ul怎么能全点呢,留一点可以接着用这个产物PCR,那条带就会像电灯泡一样亮;
然后,你这个电泳条带不是很亮,胶回收损失率会达到80%,回收回来的只有2-50ng/ul而已;
最后,建议用Qiagen公司的 PCR purification Kit试剂盒,直接将PCR产物回收即可,回收率达到90%以上
谢谢!
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
2楼2014-05-27 16:50:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fanbobecky

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-05-27 16:50:12
楼主
首先,RACE的产物50ul怎么能全点呢,留一点可以接着用这个产物PCR,那条带就会像电灯泡一样亮;
然后,你这个电泳条带不是很亮,胶回收损失率会达到80%,回收回来的只有2-50ng/ul而已;
最后,建议用Qiagen ...

请问如果我的pcr体系是20ul,电泳检测的时候点多少样合适啊?
3楼2014-06-16 09:11:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-06-17 11:40:48
从图上看,你没有获得单一目的条带,很有可能引物设计的不够理想哦

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-06-16 09:58:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XOooZzz

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by fanbobecky at 2014-06-16 09:11:48
请问如果我的pcr体系是20ul,电泳检测的时候点多少样合适啊?...

看你的电泳检测是要做什么用。
要检测后切胶回收做后续实验的,留2uL以防万一就够了。
只是看看PCR效果的,取2~3uL电泳就够了。

RACE条带不单一很正常。可以把个条带都切出来测序看看。
5楼2014-06-16 14:23:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

804371539

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

请问楼主怎么确定3’产物大小呢?急急急
6楼2016-04-01 22:37:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

prthefu

木虫 (著名写手)

我也要做race,能不能以后多交流,估计我有好多问题想跟你请教呢

发自小木虫Android客户端
nothing is impossible in this world,if you have the will to win,you can achieve anything
7楼2016-04-02 00:50:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 答案24 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 19:50 by CgyNCDVNhGVg
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 17:59 by CgyNCDVNhGVg
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 17:23 by CgyNCDVNhGVg
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-15 16:59 by CgyNCDVNhGVg
[博后之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-15 16:50 by CgyNCDVNhGVg
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 3/150 2026-09-15 15:27 by CgyNCDVNhGVg
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 14:50 by VMDqgnlKimtZ
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 14:38 by VMDqgnlKimtZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 14:34 by VMDqgnlKimtZ
[教师之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:14 by C79jjtjAKjEn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 08:02 by C79jjtjAKjEn
[考博] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:58 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:46 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 07:02 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-15 06:49 by 5BDX0d0WFp7t
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:01 by 5BDX0d0WFp7t
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 23:13 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 浙江师范大学是怎么坑我的 +6 recruit123 2026-09-09 6/300 2026-09-14 12:00 by 萨仁其其格
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
信息提示
请填处理意见