| 查看: 14147 | 回复: 26 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
蓝老虎317银虫 (初入文坛)
|
[求助]
求助！！！质粒转化一直不成功 已有13人参与
|
|
|
最近质粒转化。是用BL21-DE3做表达。 有一次是一个师兄带着做，这里操作说明一下：（1）取1ul的质粒，然后用100ul的枪将感受态吸出来，打入含有1ul的tube中，吹打三四次，放半小时，(2)热激60s，(3)冰上放2min,(4)直接涂板（备注：这里涂布棒都是酒精灯烧过晾干的），过夜，结果长不出菌落。 前两次是自己做， 步骤大体相类似：(1)我直接将1ul的质粒加入到感受态的tube中（稍融化），没有吹打，只是用枪在感受态中旋转了四五圈，放半小时（2）热激90s，（3）冰上放2min，（4）加不含抗性LB 900ul到tube中，170r/min，1小时；（5）离心12000rp 1min ，去上清液900ul，剩下100ul吹打混匀；（6）涂板，过夜。 这里我和师兄的操作有些许区别： 1、很多同学觉得不加LB摇菌的话，菌可能含量太少，那是不是一定要摇呢？ 2、师兄之所以不摇，是因为之前做另一个质粒转化的时候，直接涂，的确长出了单克隆菌。 现在经过好几次的折腾，就是一个菌不长。感受态（借给其他组同学，她加自己的其他10ul质粒，其余步骤和我一样，长出了单克隆菌），抗性（自己用的卡纳和氨苄在其他菌表达的时候都是有效的），质粒质量（老板保证说质粒是没有问题的），可是依然没能长出单克隆菌。 我想问一下还有哪些可能的因素影响质粒的转化。 谢谢各位了！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有137人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 我做质粒扩增诱变pcr 结果正确，但是转化进入感受态不长菌，为何？
已经有3人回复
- 空质粒可以转化如目的菌中，加入目的片段后怎么也转化不进去
已经有10人回复
- 大质粒转化 感受态细胞问题
已经有23人回复
- 电击转化各种不长，求助啊~~~
已经有6人回复
- 连接转化假阳性提不出来质粒吗？
已经有8人回复
- 关于质粒扩增和感受态转化
已经有5人回复
- 转化感受态后提取质粒，测浓度总是很低
已经有17人回复
- 求助：质粒为什么转化感受态转不进去
已经有11人回复
- 目的片段+pPIC9K载体转化大肠杆菌DH5a后提取质粒失败
已经有13人回复
- 急！ 质粒不相容性 线性的两个质粒还会发生这种现象吗
已经有11人回复
- 转化后提不出质粒
已经有11人回复
- 转化后不长菌落或不表达！
已经有4人回复
- 质粒转化与表达
已经有19人回复
- 酵母质粒转化的问题！急！！！大家请关注
已经有5人回复
- 挑菌扩大培养提不出质粒
已经有19人回复
- 连接转化不成功问题
已经有17人回复
- 菌株构建成功后，再复苏保存的菌种，提不出质粒，怎么办？
已经有9人回复
- 质粒转染成功后质粒小提出现了问题
已经有4人回复
- 转质粒不成功,好几次了,大家给分析一下问题会出在哪里
已经有11人回复
- 啤酒酵母质粒转化求助
已经有7人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌转化质粒，出来的不是我要的了，怎么回事？
已经有13人回复
- 【求助/交流】质粒的转化体积为什么不能超过感受态的十分之一
已经有16人回复
- 【求助/交流】关于质粒转化，求高手指导！！（附图）
已经有4人回复
- 【求助/交流】DH5a转化后涂板时间的问题？
已经有8人回复
鬼羽帝魂
木虫 (著名写手)
- 应助: 183 (高中生)
- 金币: 3100.2
- 散金: 19
- 红花: 12
- 帖子: 1427
- 在线: 186.8小时
- 虫号: 2538789
- 注册: 2013-07-09
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
10楼2014-05-06 17:31:02
2楼2014-05-06 12:17:10
蓝老虎317
银虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 545.8
- 帖子: 9
- 在线: 13.7小时
- 虫号: 2863584
- 注册: 2013-12-11
- 性别: GG
- 专业: 药理学其他科学问题
3楼2014-05-06 12:22:49
4楼2014-05-06 12:26:52
