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同源重组阳性单菌落问题已有2人参与
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最近在做同源重组， 想把一个荧光蛋白的基因整合到大肠杆菌基因组的某个地方里， 用的是 red recombinase. 好不容易筛选到几个阳性菌落后做菌落PCR， 引物选用construct上下游的各一段基因，可是每个单菌落pcr出来都有两条带， 一条大小2kb，恰好是整合进去的结果，一条是300bp（类似WT的结果）， 是没整合进去的意思。 我以为是单菌落不纯， 于是用验证过的阳性单菌落再涂reduction plate， 再挑单菌落pcr得出来的结果还是混合2kb条带和300bp条带的结果，为啥一个单菌落里会有两种基因型呢？？？？各位大侠有什么解释和办法么，，，好不容易有一个结果~~~(>_< ~~~ |
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张凡云
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必须看了呀。基本就是按着这个做的。3楼2014-04-30 18:52:59
zhaodahe
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