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liondolphin

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[求助] red系统敲除用的感受态能放多久？同源臂太长会不会反而不好敲？已有2人参与

red重组系统中含有pkd46质粒的菌在加阿拉伯糖诱导后做成电转感受态，它在转线性片段之前能在-80冰箱里放多久呀？我敲的是大肠DH5a，同源臂搞了个两边各800bp的，结果转了2次，长了好多，结果就一个可能是我要的，是不是同源臂太长了的缘故？

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1楼 2014-01-03 17:22:32

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朱多龙

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【答案】应助回帖

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liondolphin: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2014-01-05 11:04:59
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-05 15:17:25

一般存到负80是有什么问题的，关键你要是诱导表达那三个功能蛋白后再存可能就会有影响，最好还是诱导完做好感受态直接使用。还有就是同源臂的问题，在大肠里每端200bp足够了。太多了有时候会有其它位点重组的可能。

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2楼2014-01-03 17:37:06

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liondolphin

银虫 (初入文坛)

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2楼: Originally posted by 朱多龙 at 2014-01-03 17:37:06
一般存到负80是有什么问题的，关键你要是诱导表达那三个功能蛋白后再存可能就会有影响，最好还是诱导完做好感受态直接使用。还有就是同源臂的问题，在大肠里每端200bp足够了。太多了有时候会有其它位点重组的可能。

原来如此，看来不能偷懒啊，原本因为dh5a和bl21(de3)都要敲，所以按照bl21弄了个长的同源臂，结果就弄不好了

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3楼2014-01-04 18:20:23

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