应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » red系统敲除用的感受态能放多久？同源臂太长会不会反而不好敲？
81/1返回列表
查看: 2432  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

liondolphin

银虫 (初入文坛)

[求助] red系统敲除用的感受态能放多久？同源臂太长会不会反而不好敲？ 已有2人参与

red重组系统中含有pkd46质粒的菌在加阿拉伯糖诱导后做成电转感受态，它在转线性片段之前能在-80冰箱里放多久呀？我敲的是大肠DH5a，同源臂搞了个两边各800bp的，结果转了2次，长了好多，结果就一个可能是我要的，是不是同源臂太长了的缘故？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-01-03 17:22:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

朱多龙

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liondolphin: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2014-01-05 11:04:59
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-05 15:17:25
一般存到负80是有什么问题的，关键你要是诱导表达那三个功能蛋白后再存可能就会有影响，最好还是诱导完做好感受态直接使用。还有就是同源臂的问题，在大肠里每端200bp足够了。太多了有时候会有其它位点重组的可能。
赞一下 回复此楼
2楼2014-01-03 17:37:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liondolphin

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 朱多龙 at 2014-01-03 17:37:06
一般存到负80是有什么问题的，关键你要是诱导表达那三个功能蛋白后再存可能就会有影响，最好还是诱导完做好感受态直接使用。还有就是同源臂的问题，在大肠里每端200bp足够了。太多了有时候会有其它位点重组的可能。

原来如此，看来不能偷懒啊，原本因为dh5a和bl21(de3)都要敲，所以按照bl21弄了个长的同源臂，结果就弄不好了

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
3楼2014-01-04 18:20:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bolysu

禁虫 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
4楼2014-01-05 10:18:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liondolphin

银虫 (初入文坛)
???????:
4?: Originally posted by bolysu at 2014-01-05 10:18:57
???BL21?ó?????

没有，长得好奇怪,电转???长了满???,稀释10000????涂????微好点

[ ????С??????? ]
赞一下 回复此楼
5楼2014-01-05 11:03:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liondolphin

银虫 (初入文坛)
???????:
5?: Originally posted by liondolphin at 2014-01-05 11:03:44
没有，长得好奇怪,电转???长了满???,稀释10000????涂????微好点
...

?????????Bl21??ó????pkd46????????????????????????γ????????????ζ?????????????10000?????е???????????????????
赞一下 回复此楼
6楼2014-01-05 17:07:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蝶影拂袖

银虫 (小有名气)
敲BL21的话同源臂是要很长的，五六百是要的~另外感受态最好新做，不然重组效率低，本来BL21就难做一些
赞一下 回复此楼
7楼2014-02-27 17:10:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

沁荃

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by liondolphin at 2014-01-05 17:07:57
烦人的乱码，Bl21没敲成功，pkd46很难转进去，进去之后电转线性片段长得又很奇怪，每次都长成片，稀释了10000倍才有单菌落，都不知道是什么情况...

我用长同源臂敲BL21的基因也是长了一大片，但是挑了20多个菌都没有正确的是怎么回事啊~你遇到过这种情况么~谢谢~
赞一下 回复此楼
8楼2014-06-05 22:49:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liondolphin 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 279求调剂 +3 dua1 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:23 by 大脸蛋子
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分，求调剂 +5 wsl111 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:45 by 暮雨星晴
[基金申请] 成果系统访问量大，请一小时后再尝试。---NSFC啥时候好哦，已经两天这样了 +4 NSFC2026我来了 2026-02-28 4/200 2026-03-01 22:37 by 铁门栓
[考研] 26考研报考西工大材料308分求调剂 +3 weizhong123 2026-03-01 3/150 2026-03-01 21:42 by 公瑾逍遥
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 0856求调剂285 +10 吕仔龙 2026-02-28 10/500 2026-03-01 21:37 by 公瑾逍遥
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 12/600 2026-03-01 19:48 by 好好好1233
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考研] 0856化工专硕求调剂 +12 董boxing 2026-03-01 12/600 2026-03-01 19:45 by 材子momo
[考研] 化工专硕348，一志愿985求调剂 +5 弗格个 2026-02-28 8/400 2026-03-01 17:25 by sunny81
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 材料284求调剂，一志愿郑州大学英一数二专硕 +10 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 10/500 2026-03-01 14:12 by yc258
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭