应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » red系统敲除用的感受态能放多久？同源臂太长会不会反而不好敲？
81/1返回列表
查看: 2464  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

liondolphin

银虫 (初入文坛)

[求助] red系统敲除用的感受态能放多久？同源臂太长会不会反而不好敲？ 已有2人参与

red重组系统中含有pkd46质粒的菌在加阿拉伯糖诱导后做成电转感受态，它在转线性片段之前能在-80冰箱里放多久呀？我敲的是大肠DH5a，同源臂搞了个两边各800bp的，结果转了2次，长了好多，结果就一个可能是我要的，是不是同源臂太长了的缘故？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-01-03 17:22:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

朱多龙

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liondolphin: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2014-01-05 11:04:59
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-05 15:17:25
一般存到负80是有什么问题的，关键你要是诱导表达那三个功能蛋白后再存可能就会有影响，最好还是诱导完做好感受态直接使用。还有就是同源臂的问题，在大肠里每端200bp足够了。太多了有时候会有其它位点重组的可能。
赞一下 回复此楼
2楼2014-01-03 17:37:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liondolphin

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 朱多龙 at 2014-01-03 17:37:06
一般存到负80是有什么问题的，关键你要是诱导表达那三个功能蛋白后再存可能就会有影响，最好还是诱导完做好感受态直接使用。还有就是同源臂的问题，在大肠里每端200bp足够了。太多了有时候会有其它位点重组的可能。

原来如此，看来不能偷懒啊，原本因为dh5a和bl21(de3)都要敲，所以按照bl21弄了个长的同源臂，结果就弄不好了

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
3楼2014-01-04 18:20:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bolysu

禁虫 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
4楼2014-01-05 10:18:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liondolphin

银虫 (初入文坛)
???????:
4?: Originally posted by bolysu at 2014-01-05 10:18:57
???BL21?ó?????

没有，长得好奇怪,电转???长了满???,稀释10000????涂????微好点

[ ????С??????? ]
赞一下 回复此楼
5楼2014-01-05 11:03:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liondolphin

银虫 (初入文坛)
???????:
5?: Originally posted by liondolphin at 2014-01-05 11:03:44
没有，长得好奇怪,电转???长了满???,稀释10000????涂????微好点
...

?????????Bl21??ó????pkd46????????????????????????γ????????????ζ?????????????10000?????е???????????????????
赞一下 回复此楼
6楼2014-01-05 17:07:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蝶影拂袖

银虫 (小有名气)
敲BL21的话同源臂是要很长的，五六百是要的~另外感受态最好新做，不然重组效率低，本来BL21就难做一些
赞一下 回复此楼
7楼2014-02-27 17:10:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

沁荃

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by liondolphin at 2014-01-05 17:07:57
烦人的乱码，Bl21没敲成功，pkd46很难转进去，进去之后电转线性片段长得又很奇怪，每次都长成片，稀释了10000倍才有单菌落，都不知道是什么情况...

我用长同源臂敲BL21的基因也是长了一大片，但是挑了20多个菌都没有正确的是怎么回事啊~你遇到过这种情况么~谢谢~
赞一下 回复此楼
8楼2014-06-05 22:49:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liondolphin 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854调剂 +10 长弓傲 2026-04-11 11/550 2026-04-13 10:38 by wp06
[考研] 071000生物学，一志愿深圳大学296分，求调剂 +13 TIckLw 2026-04-06 14/700 2026-04-13 08:49 by 可淡不可忘
[考研] 271求调剂 +23 2261744733 2026-04-11 23/1150 2026-04-13 08:48 by 学zh
[考研] 085600材料与化工，求调剂 +12 won_qii 2026-04-07 12/600 2026-04-12 17:02 by lhj2009
[考研] 求调剂，一志愿材料科学与工程985，365分， +8 材化李可 2026-04-11 10/500 2026-04-12 08:42 by 852137818
[考研] 药学专硕调剂 +8 ? 一路生?花? 2026-04-10 10/500 2026-04-11 21:21 by zhouxiaoyu
[考研] 求调剂，一志愿大连理工大学354分 +5 雨声余生 2026-04-11 6/300 2026-04-11 16:12 by 雨声余生
[考研] 085501机械专硕 302分 不挑专业求调剂 +7 汪某. 2026-04-09 7/350 2026-04-11 14:37 by luhong1990
[考研] 一志愿东北大学控制工程085406数二英二385，求调剂 +8 Ezra_Zhang 2026-04-09 8/400 2026-04-11 09:15 by 猪会飞
[考研] 一志愿211，化学310分，本科重点双非，求调剂 +23 努力奋斗112 2026-04-08 23/1150 2026-04-10 23:29 by 314126402
[考研] 302分求调剂 +9 凡语祈愿 2026-04-08 10/500 2026-04-10 23:26 by 314126402
[考研] 0858求调剂 5+5 Gky09300550， 2026-04-10 8/400 2026-04-10 19:13 by chemisry
[考研] 初试261 +3 Asht少 2026-04-10 6/300 2026-04-10 16:38 by Asht少
[考研] 273求调剂 +51 麦小叮当 2026-04-06 58/2900 2026-04-10 15:54 by jiajinhpu
[考研] 292求调剂 +9 笑笑袁 2026-04-09 9/450 2026-04-10 10:05 by LHGeng
[考研] 348求调剂 +3 candyyyi 2026-04-09 3/150 2026-04-09 17:20 by 段伟艳
[考研] 求机械专硕297第二批调剂 +5 拾柒12。 2026-04-08 5/250 2026-04-09 16:43 by 允当适度
[考研] 327求调剂 +10 Xxjc1107. 2026-04-06 11/550 2026-04-09 01:21 by lature00
[考研] 0703化学调剂 348分 +14 唉我超真没招了 2026-04-06 15/750 2026-04-08 19:16 by 我减肥1
[考研] 材料调剂 +17 小刘同学吖吖 2026-04-06 18/900 2026-04-07 11:41 by 诗与自由
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭