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飘落无踪

金虫 (初入文坛)

[求助] 方法学中分离度相关问题 已有5人参与

最近在做新药的方法学,做系统适用性时分离度是2.2左右,都大于1.5,可在做方法学其他内容时分离度却都是1.1左右,小于1.5,流动相是缓冲盐和甲醇,我想知道是什么导致分离度下降,柱子是新的。还有,如果我不重新做的话1.1的分离度能够达到申报要求吗?请大家指点!谢啦!!!
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mrzouhao

木虫之王 (文坛精英)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
News: 金币+1 2014-04-26 06:57:18
HPLC影响色谱峰分离度的因素有:流动相的变化、固定相的变化(含色谱柱)、柱温、流速等。一般的,主要影响因素为流动相的改变和固定相的改变,柱温和流速变化对分离度有一定影响,非主要影响因素。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2014-04-26 06:09:43
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农场小猪

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
飘落无踪(News代发): 金币+1, 多谢回帖交流 2014-04-30 08:24:01
飘落无踪: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-05-05 21:24:12
方法没变。这么快就出现分离度差,
我觉得楼主可以不光看分离度。吧拖尾因子和理论板数也和之前分离度2.2的时候进行比较。
举例子:1比如你的样品,溶剂碱性或者酸性很大,多次进样后,你的色谱柱可能因为不是特定的耐性广范围柱,柱效差了 ,导致你的分离度不好。或者使用过程中不太注意保养,上高流速的时候都是直接大流速直接上,柱头冲塌了。或者用完盐后水冲不够,导致柱效
2.就像4楼说的 ,柱温。PH.流速可能对你都有影响,不是所有的品种的HPLC方法耐用性都很好的,有些就是耐用性不好,对于PH 有机相比例,或者色谱柱要求比较苛刻,这些条件的一些变化可能对于色谱行为会产生很大的影响。
我个人想到的就是这些,我觉得你之前能做出来,后面无法重现了 可能和这些有关
8楼2014-04-29 17:30:30
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普通回帖

News

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
方法开发时或者以前没有发生这种情况吗?
水滴石穿!!
2楼2014-04-25 20:38:43
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li1634

铜虫 (初入文坛)


飘落无踪(zhychen2008代发): 金币+1, 多谢回帖交流 2014-04-28 16:53:24
测测缓冲盐的pH

[ 发自小木虫客户端 ]
Hot Fuck Noodles
3楼2014-04-26 00:17:37
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gfshksdl

新虫 (小有名气)


换换柱子
5楼2014-04-26 13:35:47
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raulsam1984

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
飘落无踪(zhychen2008代发): 金币+1, 多谢 2014-04-28 16:53:58
飘落无踪(News代发): 金币+1, 多谢回贴交流 2014-04-28 16:54:10
楼主,你是用同一根色谱柱做系统适应性和其它内容吗?按道理同一根色谱柱(而且是新的)不会出现这种情况,要不就是你方法的“耐用性”不是很好。或者你换一根色谱柱试试。
6楼2014-04-28 16:04:29
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henryyelei

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
飘落无踪(News代发): 金币+1, 多谢回贴交流 2014-04-30 08:24:31
飘落无踪: 金币+5, 有帮助 2014-05-05 21:24:36
当你的分离度达不到要求的时候,再进一针系统适应性溶液,看分离度是不是还是1.1,如果系统溶液是好的,样品不行,要么你的系统溶液有问题(不是最近的两个峰),要么你的色谱系统有问题,但总的来说,你的方法不可行,需重新开发方法
7楼2014-04-29 08:18:35
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飘落无踪

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by li1634 at 2014-04-26 00:17:37
测测缓冲盐的pH

恩,谢谢啦!
9楼2014-05-05 21:25:58
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飘落无踪

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by mrzouhao at 2014-04-26 06:09:43
HPLC影响色谱峰分离度的因素有:流动相的变化、固定相的变化(含色谱柱)、柱温、流速等。一般的,主要影响因素为流动相的改变和固定相的改变,柱温和流速变化对分离度有一定影响,非主要影响因素。
...

好的,十分感谢!
10楼2014-05-05 21:26:21
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