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飘落无踪

金虫 (初入文坛)

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专业: 色谱分析

[求助] 方法学中分离度相关问题已有5人参与

最近在做新药的方法学，做系统适用性时分离度是2.2左右，都大于1.5，可在做方法学其他内容时分离度却都是1.1左右，小于1.5，流动相是缓冲盐和甲醇，我想知道是什么导致分离度下降，柱子是新的。还有，如果我不重新做的话1.1的分离度能够达到申报要求吗？请大家指点！谢啦！！！

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1楼 2014-04-25 16:52:00

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农场小猪

铜虫 (小有名气)

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专业: 药物分析

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
飘落无踪(News代发): 金币+1, 多谢回帖交流 2014-04-30 08:24:01
飘落无踪: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-05-05 21:24:12

方法没变。这么快就出现分离度差，
我觉得楼主可以不光看分离度。吧拖尾因子和理论板数也和之前分离度2.2的时候进行比较。
举例子：1比如你的样品，溶剂碱性或者酸性很大，多次进样后，你的色谱柱可能因为不是特定的耐性广范围柱，柱效差了，导致你的分离度不好。或者使用过程中不太注意保养，上高流速的时候都是直接大流速直接上，柱头冲塌了。或者用完盐后水冲不够，导致柱效
2.就像4楼说的，柱温。PH.流速可能对你都有影响，不是所有的品种的HPLC方法耐用性都很好的，有些就是耐用性不好，对于PH 有机相比例，或者色谱柱要求比较苛刻，这些条件的一些变化可能对于色谱行为会产生很大的影响。
我个人想到的就是这些，我觉得你之前能做出来，后面无法重现了可能和这些有关