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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 电泳的时候，总DNA跑出条带，PCR扩增后没有条带，都有什么原因啊
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暖阳ny2

新虫 (初入文坛)

[求助] 电泳的时候，总DNA跑出条带，PCR扩增后没有条带，都有什么原因啊 已有5人参与

我用的是金黄色葡萄球菌，5%chelex-100作的裂解液，高温水煮方法提的DNA
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1楼 2014-04-23 19:28:31
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
dllchina: 金币+1, good~ 2014-04-24 21:38:08
你这个问题太大了，首先你要确定一下你的DNA的质量，然后PCR的时候，有没有正对照？如果CK+是可以的，那么要考虑你的DNA质量了。
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致良知
2楼2014-04-23 20:58:32
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
影响PCR扩增结果原因多了，没有条带，就试着从源头找起，如引物特异性，体系，程序等。
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学习使你立于不败之地
3楼2014-04-23 21:11:47
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20093651

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
dllchina: 金币+1 2014-04-24 21:37:56
引物量，DNA浓度太高，PCR条件没弄好
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但行好事，莫问前程
4楼2014-04-24 09:34:40
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a188202881a

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是pcr体系没找好，或者是dna提纯不好

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2014-04-24 09:49:17
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xichun

新虫 (初入文坛)
多半和你的引物设计和量有关系，体系也可能有关系。
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6楼2014-04-24 10:19:13
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hgdcongcong

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先跑电泳能出条带，请问条带位置正确吗？如果不正确，会不会是DNA制备过程中讲解了，或者其他原因导致DNA受损；如果条带位置正确，那么就很有可能是PCR体系环节有问题，比如使用的引物是否有效（特异性、合成引物本身的质量），扩增参数设置（退火温度是否合适、延伸时间是否足够）是否正确等等。
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7楼2014-04-24 16:47:12
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暖阳ny2

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by hgdcongcong at 2014-04-24 16:47:12
首先跑电泳能出条带，请问条带位置正确吗？如果不正确，会不会是DNA制备过程中讲解了，或者其他原因导致DNA受损；如果条带位置正确，那么就很有可能是PCR体系环节有问题，比如使用的引物是否有效（特异性、合成引物 ...

谢谢哦，验证了下，应该是引物有问题
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8楼2014-05-05 11:28:09
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
常常遇到这种问题，换了试剂盒使用高保真Taq酶扩增，效果都不错
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
9楼2015-07-16 15:47:46
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