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暖阳ny2

新虫 (初入文坛)

[求助] 电泳的时候,总DNA跑出条带,PCR扩增后没有条带,都有什么原因啊 已有5人参与

我用的是金黄色葡萄球菌,5%chelex-100作的裂解液,高温水煮方法提的DNA
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
dllchina: 金币+1, good~ 2014-04-24 21:38:08
你这个问题太大了,首先你要确定一下你的DNA的质量,然后PCR的时候,有没有正对照?如果CK+是可以的,那么要考虑你的DNA质量了。
致良知
2楼2014-04-23 20:58:32
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
影响PCR扩增结果原因多了,没有条带,就试着从源头找起,如引物特异性,体系,程序等。
学习使你立于不败之地
3楼2014-04-23 21:11:47
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20093651

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
dllchina: 金币+1 2014-04-24 21:37:56
引物量,DNA浓度太高,PCR条件没弄好
但行好事,莫问前程
4楼2014-04-24 09:34:40
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a188202881a

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是pcr体系没找好,或者是dna提纯不好

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-04-24 09:49:17
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xichun

新虫 (初入文坛)

多半和你的引物设计和量有关系,体系也可能有关系。
6楼2014-04-24 10:19:13
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hgdcongcong

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
首先跑电泳能出条带,请问条带位置正确吗?如果不正确,会不会是DNA制备过程中讲解了,或者其他原因导致DNA受损;如果条带位置正确,那么就很有可能是PCR体系环节有问题,比如使用的引物是否有效(特异性、合成引物本身的质量),扩增参数设置(退火温度是否合适、延伸时间是否足够)是否正确等等。
7楼2014-04-24 16:47:12
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暖阳ny2

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by hgdcongcong at 2014-04-24 16:47:12
首先跑电泳能出条带,请问条带位置正确吗?如果不正确,会不会是DNA制备过程中讲解了,或者其他原因导致DNA受损;如果条带位置正确,那么就很有可能是PCR体系环节有问题,比如使用的引物是否有效(特异性、合成引物 ...

谢谢哦,验证了下,应该是引物有问题
8楼2014-05-05 11:28:09
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

常常遇到这种问题,换了试剂盒使用高保真Taq酶扩增,效果都不错
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
9楼2015-07-16 15:47:46
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