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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 配SDS-PAGE蛋白胶，分离胶凝，但是浓缩胶怎么都不凝怎么回事？
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张冰宝

新虫 (小有名气)

[求助] 配SDS-PAGE蛋白胶，分离胶凝，但是浓缩胶怎么都不凝怎么回事？ 已有18人参与

最近在做蛋白电泳，配SDS-PAGE时分离胶可以凝，但是浓缩胶怎么都不凝，尝试了各种办法，重新配AP,SDS,丙烯酰胺，tris-hcl 8,8 和tris-hcl6,8.确定药品都没有过期，分离胶凝的很快，浓缩胶怎么都不凝，已经试过n多次了。。恳请了解的大侠们给找找原因，万分感谢
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1楼 2014-04-18 19:48:09
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

刘堃

金虫 (正式写手)
配置堆积胶之前，你确定试剂量没加错？天气还不是太热，配胶前要把试剂稍微加热一下，不要有结晶出现；加入一种催化剂之后一定要充分摇匀后再加另一种催化剂。可以放在30摄氏度左右的培养箱中，切记温度不可太高。
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7楼2014-04-19 19:10:17
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
遥想当年，怎么把SDS-PAGE搞凝了，也是我的主要困惑。哈哈。

凭直觉，我建议你检查一下，你用的水，是水么？

是不是把封胶的异丙醇当水用了？？闻一下你的胶？
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2楼2014-04-18 21:28:47
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
很大原因是温度，放到37℃培养箱，要是还不凝，就是试剂问题了
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5楼2014-04-19 09:16:52
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张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
46楼: Originally posted by meng_xu at 2014-05-02 07:13:06
如果你所stacking和resolving的所有材料，除了两个buffer以外都是一样的，那还是你哪步做错了，再重新细细做一次看看，同时让别人做一组，做对照

感谢各位大侠，原因找到了是我们实验室的水出了问题，水偏酸性。导致其不凝。
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47楼2014-05-06 08:08:01
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普通回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)
我确定是水的。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2014-04-18 21:49:18
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张冰宝

新虫 (小有名气)
恳请懂得的大侠帮帮忙，救急啊
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4楼2014-04-19 08:32:17
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张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by silicare at 2014-04-19 09:16:52
很大原因是温度，放到37℃培养箱，要是还不凝，就是试剂问题了

放温箱培养了，浓缩胶不凝。试剂都是新配的，确定AP没有潮解，sds和tris都是新买的试剂。TEMED没有问题，不然分离胶也不会凝。丙烯酰胺都是按照说明书重新配的。。浓缩胶就是不凝。师姐半个月之前还配了蛋白胶，没出现这种问题。希望大家能帮出出主意，万分感谢
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6楼2014-04-19 10:51:59
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张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 刘堃 at 2014-04-19 19:10:17
配置堆积胶之前，你确定试剂量没加错？天气还不是太热，配胶前要把试剂稍微加热一下，不要有结晶出现；加入一种催化剂之后一定要充分摇匀后再加另一种催化剂。可以放在30摄氏度左右的培养箱中，切记温度不可太高。

试剂不会加错的，这个配胶的过程我已经做了n多次，并且师姐也帮着做了很多次，放在温箱 ，阳光下浓缩胶都不凝，分离胶凝的很快，tris-hcl也重新配了三次确定没有问题。
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8楼2014-04-20 16:18:22
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Apeterson

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我的建议是换个人帮你配一下，如果这个人也出现这个问题，那么你需要重视一下，如果他做出来了，就说明你习惯性的操作了一步错误，这种情况有可能的，当一个人总是做错实验的话 其实不过是陷入死循环了，清醒一下就好了
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考研奋斗中····
9楼2014-04-21 01:14:49
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worgjin

木虫 (小有名气)
你确认配方没有错？多找几个来源看看
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10楼2014-04-21 10:30:53
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