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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 配SDS-PAGE蛋白胶，分离胶凝，但是浓缩胶怎么都不凝怎么回事？
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realgwt2008

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

AP现用现配，剂量加大50%
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21楼2014-04-25 08:31:26
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yu756849034

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你静止了多长时间啊，加上之后最好不要摇动，静止半个小时左右就差不多了！
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不作死不会死！！！
22楼2014-04-25 08:36:02
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

浓缩胶和分离胶唯一区别就是Tris-Cl和浓度，配方是否正确？
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23楼2014-04-25 09:09:16
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张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
21楼: Originally posted by realgwt2008 at 2014-04-25 08:31:26
AP现用现配，剂量加大50%

这个方法 试过了，不凝。在加大AP的同时还加大了TEMED 的量。结果还是不行
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24楼2014-04-25 10:12:41
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张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by yu756849034 at 2014-04-25 08:36:02
你静止了多长时间啊，加上之后最好不要摇动，静止半个小时左右就差不多了！

静止时间一般都高于半小时，有的甚至两三个小时都不凝。放在温度高些的地方也不行
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25楼2014-04-25 10:14:46
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张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
23楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-04-25 09:09:16
浓缩胶和分离胶唯一区别就是Tris-Cl和浓度，配方是否正确？

最开始我们就考虑过这个原因，因为分离胶一直都凝并且凝的特别快，所以怀疑是tris-hcl6.8 的问题，买的粉末重新配的试剂，在确定没有任何问题的情况下没事没凝。后来直接从别人那借的成品，不需要自己配的那种。也还是没有凝。不知该怎么办了
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26楼2014-04-25 10:17:43
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言语sky

木虫 (知名作家)

❤

【答案】应助回帖

这个~~~只要按照配方配肯定没问题的~~~~你再好好看看你的配方，应该是什么地方出错了~~我原来做的时候没出现过，有时候实验室温度高点的话，就去别的温度相对低点的实验室做胶，或许是你的实验室的温度过高
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(∩_∩)*会长大的幸福~
27楼2014-04-25 11:09:43
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张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
27楼: Originally posted by 言语sky at 2014-04-25 11:09:43
这个~~~只要按照配方配肯定没问题的~~~~你再好好看看你的配方，应该是什么地方出错了~~我原来做的时候没出现过，有时候实验室温度高点的话，就去别的温度相对低点的实验室做胶，或许是你的实验室的温度过高

实验室温度一般在28度左右，应该不算高。同样的配方，我师姐在前两周做还是没有什么问题的。哎。
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28楼2014-04-25 12:23:22
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

tris-Hcl的ph有没有弄混？

[ 发自小木虫客户端 ]
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天道酬勤
29楼2014-04-25 12:47:45
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张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
29楼: Originally posted by 随风飘摇11 at 2014-04-25 12:47:45
tris-Hcl的ph有没有弄混？

这个不会。因为标定时都是单独标定的。还有就是我用试纸分别试过。不会弄混。
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30楼2014-04-25 13:34:34
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