24小时热门版块排行榜    

查看: 2877  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

cassiett90

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问在大肠杆菌中表达蛋白时会不会只表达一段目的蛋白?怎么解决呢?求高人指点 已有5人参与

我最近一直在试着用大肠杆菌表达一个116个氨基酸的蛋白,前面加了个132个氨基酸的sumo标签,再前面是his标签,放在pET28a中表达,目的蛋白总长度为27.6kD,但跑胶却总是只能得到20kD的主条带,质谱显示只有sumo和那116个里面的前面一截目的蛋白,后面的都对不上,但基因测序没有一点问题,这可能是为什么呢?蛋白表达到一半自己停下了??去表达其他的了??怎么会这样呢。。求高人指教啊!!!小女子感激不尽!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cassiett90

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by resurgam at 2014-04-13 11:11:01
重新抽质粒,其中10ul重新送测序,双向测通,再分析。如果没有问题,就拿同一管质粒再做转化看看表达。看样子好像是发生了移码突变了。

嗯嗯 这么做过的 提了质粒 测序还是没问题 表达还是不对。。为什么会移码突变呢?原因可能有什么呢?从质粒的碱基序列来看 是没有移码的,我一个个看了的呢
6楼2014-04-13 22:13:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

resurgam

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
重新抽质粒,其中10ul重新送测序,双向测通,再分析。如果没有问题,就拿同一管质粒再做转化看看表达。看样子好像是发生了移码突变了。
2楼2014-04-13 11:11:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by resurgam at 2014-04-13 11:11:01
重新抽质粒,其中10ul重新送测序,双向测通,再分析。如果没有问题,就拿同一管质粒再做转化看看表达。看样子好像是发生了移码突变了。

有可能载体构建过程中出问题了

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-04-13 12:47:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有可能蛋白翻译出来后被降解掉了,或者是碰到稀有密码子、终止密码子什么的翻译中断了。
4楼2014-04-13 16:32:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +6 Ldrop2023 2026-08-13 6/300 2026-08-15 10:09 by tuanggou
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 7lpolszZVXgi 2026-08-14 6/300 2026-08-15 09:28 by sunzitan
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 7/350 2026-08-15 09:09 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] filecode +7 cratir 2026-08-14 11/550 2026-08-15 06:19 by 学员8dgXkO
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:45 by 4wMiSEwB6436
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 4/200 2026-08-15 04:17 by 4wMiSEwB6436
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 02:21 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 HFw0lei2R37i 2026-08-14 8/400 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-14 22:32 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
请填处理意见